Caracterización bioquímica y genética de la infantaricina A: Una nueva bacteriocina antineumocócica producida por la cepa de origen lácteo "streptococcus infantarius" subesp. infantarius LP90

• Autores: Cristina Campanero Pintado
• Directores de la Tesis: Pablo E. Hernández Cruza (dir. tes.), C. Herranz Sorribes (dir. tes.), L. M. Cintas Izarra (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Número de páginas: 363
• Tribunal Calificador de la Tesis: Paloma Morales Gómez (presid.), Bélen Orgaz Martin (secret.), Rosa del Campo Moreno (voc.), Antonio Basanta Díaz (voc.), Gilberto Paulo Peixoto Igrejas (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense (pdf)
• Resumen
  • español

    En este trabajo se ha investigado la utilidad del empleo de bacterias lácticas, principalmente de origen alimentario, y/o sus bacteriocinas como estrategia alternativa o complementaria a los antibióticos para el control de las infecciones causadas por Streptococcus pneumoniae en humanos, empleando para ello diversas técnicas microbiológicas, bioquímicas y genéticas. Streptococcus infantarius subesp. infantarius LP90, una cepa aislada de leche de búfala de Venezuela, ejerce una potente actividad antimicrobiana frente a cepas clínicas de S. pneumoniae de diversos serotipos y patrones de susceptibilidad a los antibióticos más empleados en medicina humana. Los resultados obtenidos mediante el empleo de diversos protocolos multicromatográficos de purificación a homogeneidad, degradación N-terminal de Edman, espectrometría de masas MALDI-TOF, producción heteróloga en Pichia pastoris y Lactococcus lactis y síntesis química de bacteriocinas, así como mediante el análisis transcripcional de un cluster multibacteriocinogénico de S. infantarius LP90, demuestran que la actividad antineumocócica de esta cepa es debida a la acción sinérgica de la infantaricina A1 (InfA1) e infantaricina A2 (InfA2), que constituyen un nuevo sistema de dos péptidos (subclase IIb) al que se denominó infantaricina A (InfA). Asimismo, InfA1 e InfA2 sintetizadas químicamente y combinadas en proporción 1:1 actúan sinérgicamente y ejercen un potente efecto bactericida frente a S. pneumoniae desarrollado en saliva humana, lo que demuestra la funcionalidad de esta bacteriocina en este fluido biológico. Considerados globalmente, los resultados de este trabajo de investigación ponen de manifiesto el potencial de la bacteriocina antineumocócica InfA (InfA1 e InfA2) como ingrediente activo de preparaciones farmacéuticas orales en el contexto de una estrategia alternativa o complementaria a la antibioterapia para el control de las infecciones causadas por S. pneumoniae en humanos.

  • English

    This research work focused on the evaluation of the potential application of lactic acidbacteria, mainly of food origin, and/or their bacteriocins as an alternative or complementarystrategy to antibiotics for the control of infections caused by Streptococcus pneumoniae inhumans by using microbiological, biochemical and genetic techniques. Chapter III describes theevaluation of the antimicrobial activity of 38 bacteriocinogenic LAB against clinical isolates ofS. pneumoniae, with different serotypes and antimicrobial resistance profiles to the antibioticsmost commonly used in human medicine, by using microbial antagonism assays (i. e., stab-onagartest [SOAT], agar well-diffusion test [ADT] and microtiter plate assay [MPA]).Streptococcus infantarius subsp. infantarius LP90, a strain isolated from Venezuelan waterbuffalomilk, was selected for further characterization due to its broad and strong antimicrobialspectrum against S. pneumoniae. Purification of the bacteriocins produced by S. infantariusLP90 by a multi-chromatographic procedure, as well as MALDI-TOF mass spectrometryanalysis, allowed to determine that the anti-pneumococcal activity of this strain is due to theproduction of, at least, a novel bacteriocin with a molecular mass of 3,963 Da, which wastermed infantaricin A (InfA). Comparison of the 19 N-terminal amino acids of InfA, obtainedby N-terminal Edman-degradation, with those present at Genbank database revealed a highhomology to an hypothetical protein of S. infantarius ATCCBAA-102...