¡Leche contaminada! validación de un método innovador para detectar y evaluar el potencial infeccioso del virus de la influenza A en leche de vaca

• Autores: Pablo Puchades Colera, A. Díaz, Inés Girón Guzmán, Enric Cuevas Ferrando, Alba Pérez Cataluña, G. Sánchez Viscoti
• Localización: XXIII Congreso Nacional de Microbiología de los Alimentos: Cartagena, 9-12 de septiembre de 2024 / coord. por Pablo Salvador Fernández Escámez, Alfredo Palop Gómez, Arturo Esnoz Nicuesa, Silvia Guillén Morer, 2024, ISBN 978-84-17853-94-5, págs. 194-197
• Idioma: español
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  • Los virus de la influenza A (IAV) representan una amenaza significativa para la salud humana y animal. Pese a las medidas de control, diferentes brotes continúan produciéndose con riesgo detransmisión zoonótica. Recientes brotes en vacas lecheras en EE. UU. de la variante H5N1 subrayan la necesidad de métodos efectivos de detección.En este estudio, se evaluó el método de adsorción-precipitación por aluminio (AlCl3) en diferentes tipos de leche (cruda, pasteurizada y UHT) para la detección de IAV. La extracción de ácidosnucleicos se realizó utilizando el equipo Maxwell® RSC con el kit Maxwell® RSC Pure Food GMO and Authentication (Promega) y la detección del ARN viral mediante RT-qPCR. Paralelamente, seoptimizó un ensayo de viabilidad basado en agentes intercalantes (Propidio de monoazida (PMAxx), Cloruro de platino (PtCl4) y Crosslinker (Promega)) en leche cruda y pasteurizada.Las recuperaciones obtenidas con el método de adsorción-precipitación mostraron mayor variabilidad para el IAV en leche cruda que en leche pasteurizada. En cuanto al ensayo deviabilidad, el pretratamiento con Crosslinker redujo completamente la señal utilizando un fragmento de gen sintético, mientras que el PtCl4 mostró los mejores resultados para el IAV(subtipo H3N2) en PBS y leche cruda. Además, se estableció el límite de detección (LoD95%) de IAV en leche cruda y pasteurizada, que fue de 2.3x105 y 6.5x104 copias genómicas (cg)/mL, respectivamente.Como parte de futuras investigaciones, se optimizará el ensayo para evaluar el potencial infeccioso de las partículas virales (subtipo H5N1) en muestras de leche de vaca.