Actividad antioxidante de carotenoides frente a hidroperósxidos lipídicos de origen endógeno y exógeno en el tracto intestinal
- Autores: Irene Carvajal Lérida
- Directores de la Tesis: Manuel Jarén Galán (dir. tes.), Antonio Pérez Gálvez (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2012
- Idioma: español
- Número de páginas: 243
- Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Rincón León (presid.), María Teresa Morales Millán (secret.), Gonzalo L. Alonso Díaz Marta (voc.), Isabel María Vicario Romero (voc.), Juan M. Garrido Fernández (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: Idus
- Resumen
El objetivo general de trabajo es determinar la implicación de antioxidantes lipofílicos, presentes en matrices alimentarías, en los procesos oxidativos de sencadenados por ERO de origen exógeno (procedentes de la dieta) y endógeno (formadas por enzimas LOX) generados a partir de hidroperóxidos lipídicos. Igualmente, se pretende descubrir nuevos focos de actividad antioxidante/no antioxidante (no explicados hasta el momento) durante el proceso digestivo y durante la asimilación de hidroperóxidos lipídicos, en los que los antioxidantes pueden contribuir a mantener el balance oxidativo de la mucosa intestinal. Este objetivo general se desarrolla en objetivos parciales.
1. Estudio de la capacidad antioxidante de pigmentos carotenoides en matrices alimenticias. Durante el proceso digestivo, carotenoides como b-caroteno, licopeno y luteína pueden desarrollar su actividad antioxidante frente a las ERO de origen exógeno que se han incorporado a través de la dieta o se han generado a consecuencia de la digestión. Se aplicará un modelo bioquímico in vitro que mimetiza las condiciones químicas y enzimáticas que secuencialmente se producen durante la digestión, se pretende estimar la interacción entre los carotenoides y las ERO, y determinar si de dicha interacción se deriva un descenso en el contenido de ERO exógenas que permanezcan disponibles para su asimilación intestinal.
2. Estudio de la absorción y el transporte de hidroperóxidos lipídicos exógenos a través de la mucosa de epitelio intestinal, en presencia de antioxidantes luminales, mediante el uso de la técnica de asimilación ex vivo con celdas tipo Ussing. El consumo de grasas insaturadas implica la entrada en nuestro organismo de hidroperóxidos lipídicos que se pueden acumular dando origen a ERO que provocan un desequilibro del estatus rédox tisular ligado al inicio y progreso de procesos degenerativos. En el lumen digestivo, que es el sistema más expuesto a la acción directa de los hidroperóxidos, actúa el sistema de defensa antioxidante de nuestro organismo para evitar la generación de ERO. Para evaluar la absorción y transporte de hidroperóxidos en el epitelio intestinal, se empleará un sistema de celdas tipo Ussing que simula el transporte, a través de células enterocíticas, desde su cara apical a la basolateral. La cantidad de hidroperóxidos lipídicos encontrados en la cara basolateral de células epiteliales intestinales se determinará espectrofotométrica mediante una técnica colorimétrica y, a partir de los datos obtenidos, se obtendrá la velocidad de difusión y permeabilidad aparente a través del tejido. Factores como la presencia de diversos antioxidantes luminales, la cantidad de hidroperóxidos en la cara apical o el estado fisiológico del tejido se tendrán en cuenta en el desarrollo del ensayo.
3. Estudio de actividad LOX en epitelio intestinal. La actividad de lipoxigenasa puede ser la causa de formación de hidroperóxidos lipídicos generadores de ERO con actividad oxidante a ambos lados del epitelio intestinal. Esta generación de un potencial oxidante endógeno es más acusada en tejidos afectados por procesos inflamatorios en el que la actividad LOX esté sobre-expresada. La determinación de la actividad LOX in vitro permitirá evaluar la capacidad de generar potencial oxidante en tejido epitelial sano frente a otro afectado por procesos inflamatorios. Se realizará un estudio secuencial que comenzará con el empleo de técnicas de HPLC para separar, identificar y cuantificar los hidroperóxidos que sirva de base para un seguimiento rutinario mediante análisis espectrofotométrico, técnica mucho más rápida y sencilla.
4. Estudio de la cinética de degradación de b-caroteno, luteína y licopeno en situaciones de estrés oxidativo originado por lipoxigenasa. En este objetivo se determinarán las consecuencias que tiene el estrés oxidativo de origen tisular con actividad LOX sobre-expresada sobre los carotenoides cuando éstos desarrollan su actividad antioxidante. Mediante un seguimiento espectrofotométrico se evaluará el descenso progresivo en la concentración de carotenoides y se establecerá la cinética de degradación de cada carotenoide, lo que marcará el nivel de implicación de cada uno de ellos en la actividad antioxidante y cómo se modifica la disponibilidad de estos compuestos para ser asimilados.
