Bases moleculares de la acidemia propiónica. Análisis funcional y estructural de mutaciones PCCA y PCCB
- Autores: Sonia Clavero Villarrubia
- Directores de la Tesis: María Belén Pérez González (dir. tes.), Lourdes Ruiz Desviat (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2005
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Fernando Valdivieso Amate (presid.), Jorgina Satrústegui Gil-Delgado (secret.), Santiago Rodríguez de Córdoba (voc.), Juan Valcárcel Juárez (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El objetivo principal de este trabajo ha sido la caracterización de las bases moleculares de la acidemia propiónica. Con este fin, hemos genotipado pacientes de acidemia propiónica, identificando nuevas variantes alélicas asociadas con esta enfermedad. Asimismo, se ha realizado un análisis estructural y funcional de las diferentes variantes alélicas para conocer el mecanismo molecular responsable de su patogénesis.
El análisis mutacional ha permitido caracterizar un total de veintitrés variantes alélicas en los pacientes analizados. El análisis proteico en fibroblastos de los pacientes proporcionó información adicional sobre el efecto fisiológico.
El efecto estructural y funcional de once variantes alélicas PCCA ha sido analizado mediante modelado estructural y expresión en un sistema eucariótico.
La proteína PCCA humana presenta dos dominios principales: el dominio biotina carboxilasa y el dominio de biotinilización, con mutaciones localizadas en ambos dominios. Debido a la homología en la secuencia polipeptídica y en la reacción catalizada, la subunidad biotina carboxilasa y la subunidad portadora de carboxibiotina (BCCP) de la Acetil-CoA carboxilasa de E.coli se eligieron como modelos estructurales de los dominios PCCA. El modelado molecular del dominio biotina carboxilasa de la proteína PCCA demuestra que todos los residuos afectados por mutaciones PCCA (con la excepción del residuo M229) se localizan en una misma región de la proteína, opuesta al sitio activo, definiendo probablemente un dominio importante desde el punto de vista estructural y/o funcional de la proteína. La mutación M229K afecta a un residuo localizado en un bolsillo hidrofóbico cercano al sitio de unión a ATP, por lo que cabe esperar que su efecto sea catalítico. En un sistema de expresión eucariótico, todas las variantes alélicas PCCA presentan una actividad enzimática relativa PCC nula, con la excepción de A75P, A138T e I164T
