Amaurosis congénita de Leber y retinosis pigmentaria de inicio precoz estudio clínico y genético

• Autores: E. Vallespin
• Directores de la Tesis: Carmen Ayuso García (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2008
• Idioma: español
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
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• Resumen

  • Índice Agradecimientos XIII Prólogo XIX Clave de abreviaturas XXII 1. Introducción 2 1.1. Breve descripción de la anatomía y fisiología de la retina 3 1.2. Aspectos clínicos y genéticos de las distrofias hereditarias de retina 9 1.2.1. Aspectos oftalmológicos de la RP 9 1.2.1.1. Síntomas 9 1.2.1.2. Pruebas clínicas más relevantes 11 1.2.2. Aspectos genéticos de la Retinosis Pigmentaria 13 1.2.2.1. La LCA y la RP-IP 13 1.3. Genes analizados en este trabajo 16 1.3.1. Aryl hydrocarbon receptor-interacting protein-like 1 (AIPL1) 16 1.3.2. Centrosomal Protein, 290-KD (CEP290) 17 1.3.3. Crumbs, Drosophila, Homolog of, 1 (CRB1) 18 1.3.4. Cone-rod homeobox-containing gene (CRX) 22 1.3.5. Guanylate Cyclase 2D, Membrane (GUCY2D) 23 1.3.6. Retinol Dehydrogenase 12 (RDH12) 24 1.3.7. Retinitis Pigmentosa GTPase Regulator-Interacting Protein (RPGRIP1) 25 1.4. Futuro de la RP 27 1.5. Ventajas y aplicaciones del estudio genético en LCA y RP-IP 29 2. Objetivos 31 2.1. Objetivo general 32 2.2. Objetivos específicos 32 3. Pacientes y métodos 34 3.1. Pacientes 35 VII 3.1.1. Criterio de inclusión 35 3.1.1.1. Criterio clínico 35 3.1.1.2. Criterio genético 35 3.1.1.3. Consentimiento informado 35 3.1.2. Número de familias estudiadas 37 3.1.2.1. 49 familias LCA 37 3.1.2.2. 128 familias RP-IP 41 3.1.3. Individuos control 48 3.2. Métodos 49 3.2.1. Protocolo de actuación 49 3.2.2. Técnicas moleculares empleadas 49 3.2.2.1. Extracción de ADN 49 3.2.2.2. Método Directo 49 3.2.2.2.1. Microarray LCA 49 3.2.2.2.2. PCR convencional: cebadores y condiciones 51 3.2.2.2.3. Análisis de restricción 55 3.2.2.2.3.1. Gel de agarosa 55 3.2.2.2.3.2. Análisis de restricción en ABI Prism 3100 56 3.2.2.2.4. dHPLC 59 3.2.2.2.5. Secuenciación automática 61 3.2.2.3. Análisis indirecto: estudio familiar 62 3.2.3. Herramientas bioinformáticas 64 3.2.3.1. Herramientas online 64 3.2.3.2. Diseño de la base de datos de distrofias de retina 65 3.2.3.2.1. Pantalla principal 65 3.2.3.2.2. Datos generales 66 3.2.3.2.3. Antecedentes geográficos 67 3.2.3.2.4. Datos oftalmológicos 68 3.2.3.2.5. Resultados 71 3.2.3.2.6. Pantalla de listados 72 4. Resultados 75 4.1. Esquema general de resultados 76 4.2. Estudio directo: microarray LCA en familias LCA y RP-IP 78 VIII 4.3. Estudio familiar 81 4.3.1. Familias consanguíneas y/o endogámicas 81 4.3.2. Mutaciones frecuentes 82 4.3.3. Cribado de genes 86 4.3.3.1. Estudio del gen CRB1 86 4.3.3.2. Estudio del gen CEP290 96 4.3.3.3. Estudio del gen RDH12 99 4.3.3.4. Estudio del gen AIPL1 101 4.3.3.5. Estudio del gen CRX 103 4.3.3.6. Estudio del gen RPGRIP1 105 4.3.3.7. Estudio del gen GUCY2D 108 4.4. Análisis de resultados 110 4.4.1. Familias caracterizadas en LCA y RP-IP 110 4.4.2. Familias caracterizadas según consanguinidad/endogamia 111 4.4.3. Espectro de genes responsables de LCA y RP-IP en España 112 4.4.4. Frecuencia de LCA en población española 113 4.4.5. Frecuencia de CRB1 en población española 113 4.5. Distribución geográfica 114 4.5.1. Familias LCA 114 4.5.2. Familias RP-IP 115 4.5.3. Familias con mutaciones en CRB1 116 4.5.4. Cambio p.Asp1114Gly (RPGRIP1) 117 4.5.5. Mutación p.Cys948Tyr (CRB1) 120 4.5. Correlación genotipo-fenotipo 122 4.5.1. Gen CRB1 122 4.5.2. Gen CEP290 127 4.5.3. Gen RDH12 127 5. Discusión 129 5.1. Esquema general de la discusión 130 5.2. Cambios frecuentes: mutaciones patogénicos versus polimorfismos 131 5.2.1. Cambio p.Asp1114Gly en RPGRIP1 131 5.2.2. Cambio p.Pro701Ser en GUCY2D 132 5.2.3. Cambio p.Tyr134Phe en AIPL1 133 IX 5.2.4. Mutación p.Cys948Tyr en CRB1 133 5.3. Cribado de genes candidatos 135 5.3.1. Estudio del gen CRB1 135 5.3.1.1. CRB1: Mutación p.Ile205Thr 135 5.3.1.2. CRB1: Nuevas mutaciones identificadas 137 5.3.1.3. CRB1: Familias con una sola mutación en heterocigosis 140 5.3.2. Estudio del gen CEP290 141 5.3.3. Estudio del gen RDH12 142 5.3.4. Estudio del gen AIPL1 143 5.3.5. Estudio del gen CRX 144 5.3.6. Estudio del gen RPGRIP1 145 5.3.7. Estudio del gen GUCY2D 146 5.4. Familias digénicas y/o trialélicas 147 5.4.1. CRB1 y RPGRIP1: Familia LCA-0038 148 5.4.2. CRB1 y RPGRIP1: Familia RP-0137 150 5.4.3. CRB1 y RPGRIP1: Familia RP-0310 150 5.4.4. CRB1 y RPGRIP1: Familia RP-1017 150 5.4.5. CRB1 y GUCY2D: Familias LCA-0012 y LCA-0042 151 5.4.6. CEP290 y RPGRIP1: Familias LCA-0037 y LCA-0039 151 5.4.7. CRX y RPGRIP1: Familia RP-0997 153 5.5. Familias caracterizadas en LCA y RP-IP 155 5.6. Espectro de genes responsables de LCA y RP-IP en población española 158 5.7. Distribución geográfica 164 5.7.1. Familias con mutaciones en CRB1 164 5.7.2. Cambio p.Asp1114Gly (RPGRIP1) 168 5.7.3. Mutación p.Cys948Tyr (CRB1) 168 5.8. Correlación genotipo-fenotipo 169 5.8.1. Gen CRB1 169 5.8.2. Gen CEP290 171 5.8.3. Gen RDH12 172 5.9. Diseño de un algoritmo diagnóstico 173 6. Conclusiones 176 X 7. Bibliografía 179 8. Publicaciones derivadas de este trabajo 198 9. Anexos 202 9.1. Anexo I: Consentimiento informado pacientes 203 9.2. Anexo II: Consentimiento informado donantes voluntarios 209