Isoformes de la lipoproteïna lipasa en humans. Variacions en l´alletament i en l´obesitat
- Autores: Míriam Badia Villanueva
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2019
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: María del Carmen López Sabater (presid.), Eva Pardina Arrese (secret.), Montserrat Carrascal Pérez (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biomedicina por la Universidad de Barcelona
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
La lipoproteína lipasa (LPL) es una enzima ampliamente distribuida en el organismo y, esto le confiere un protagonismo central en el metabolismo lipídico. Su función principal es la hidrólisis de los triacilglicéridos de las lipoproteínas circulantes. De esta hidrólisis se liberan ácidos grasos no esterificados que serán captados por los tejidos donde serán utilizados en función del contexto fisiológico. La enzima se sintetiza principalmente en el tejido adiposo, en el corazón, en el músculo esquelético y en la glándula mamaria lactante. En su forma madura y activa, la LPL es un dímero que es secretado por las células parenquimales del tejido donde se localiza y es transportado hasta la luz de los vasos donde ejercerá su función. En estudios anteriores, se encontró que la LPL de corazón y de plasma post-heparínico (PHP) de rata presentan isoformas del mismo peso molecular (MW) aparente pero diferente punto isoeléctrico (pI). Se estudiaron los posibles orígenes de la heterogeneidad de pI de estas isoformas concluyendo que: (i) las isoformas no corresponden a formas intermedias de maduración intracelular y (ii) el origen no se puede atribuir a fosforilaciones de la proteína pero, en parte, sí que se puede explicar por diferentes grados de glicosilación. En esta tesis, nos propusimos estudiar si la especie humana también presenta isoformas de pI de la LPL. Comprobamos que, tanto el PHP, como la leche y el tejido adiposo blanco (WAT) subcutáneo de humanos presentan isoformas. Asimismo, descartamos que el origen molecular sea debido a variaciones alélica o provengan de diferentes órganos, estudiando las isoformas que provienen de un único tejido de un solo individuo. Además, ampliamos el estudio de la distribución tisular de las isoformas de la LPL en rata demostrando que, en algunos fluidos y tejidos (leche, PHP de hembra y WAT retroperitoneal), coexisten, juntamente con las isoformas de pI de la LPL, isoformas de MW aparente. Postulamos que podrían tener su origen molecular en modificaciones post-traduccionales, concretamente, en la glicosilación. Hay que destacar también en ratas que el patrón de isoformas de la LPL difiere según el género y el tipo de WAT. También, avanzamos en la caracterización funcional de las isoformas de la LPL de una manera indirecta, ya que actualmente no disponemos de herramientas para estudiar cada isoforma por separado. Así, estudiamos si el patrón de isoformas de la LPL varía en situaciones fisiológicas (lactancia) y patológicas (obesidad) en las cuales la actividad de la enzima está altamente regulada. Dada la imposibilidad de obtener glándula mamaria lactante humana, estudiamos las isoformas de la LPL en rata. En este modelo los patrones de las isoformas de los fluidos y tejido estudiados (leche, PHP y glándula mamaria) difieren en sus pI, MW aparentes y cantidades relativas.
Probablemente estas variaciones tengan algún significado fisiológico. También comparamos los patrones de las isoformas de la LPL del WAT subcutáneo de individuos normopeso y obesos. Debido a la dificultad de obtener WAT visceral de humanos normopeso, ampliamos el estudio a dos modelos murinos de obesidad: inducida por dieta de cafetería y por modificación genética. Concluimos que en la obesidad las isoformas de la LPL tienden a tener una mayor representación en la zona básica del rango de pH. Complementando la caracterización funcional, planteamos estudiar si las diferentes isoformas presentan diferencias de actividad lipolítica. Gracias a la puesta a punto del método del substrato suicida para lipasas, concluimos que todas las isoformas de la LPL, purificada parcialmente mediante cromatografía de afinidad a heparina-Sepharose, son activas. La LPL es una proteína compleja y hacen falta más aproximaciones para comprender el sentido biológico de sus isoformas.
