Obtención y caracterización por cromatografía líquida de alta resolución (hplc-dad) de un estracto del alga himanthalia elongata con propiedades antioxidantes y su aplicación en la lesión por isquemia-reperfusión intestinal
- Autores: Mariola Belda Antolí
- Directores de la Tesis: Carolina Padrón Sanz (dir. tes.), Dolores Cejalvo Lapeña (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir ( España ) en 2017
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Zoraida Sosa Ferrera (presid.), Carlos Barrios Pitarque (secret.), Benjamín Sarria Chust (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
RESUMEN La lesión por isquemia/reperfusión (I/R), es la interrupción del flujo sanguíneo en un tejido por un período de tiempo, seguido de una restauración del mismo con la consecuente formación de radicales libres de oxígeno, altamente perjudiciales. Uno de los órganos más sensibles a dicha lesión es el intestino ya que responde de manera temprana aumentando su permeabilidad.
Las terapias antioxidantes parecen inhibir la formación de radicales libres evitando por tanto el deterioro orgánico originado por un exceso de estrés oxidativo. Por ello, la búsqueda y aplicación de antioxidantes naturales ha cobrado especial interés. En este sentido, las algas pardas juegan un papel importante, ya que son los únicos organismos que producen florotaninos, polifenoles que exhiben una importante actividad antioxidante. Por ello, en este trabajo se ha investigado el potencial antioxidante del extracto de Himanthalia elongata sobre el daño producido por isquemia-reperfusión intestinal.
Se optimizaron algunas variables que afectan a la extracción de los polifenoles, como son: cantidad de alga, tipo de solvente, tiempo y temperatura de extracción. Posteriormente se determinó el contenido de polifenoles totales y la actividad antioxidante, así como la identificación y cuantificación de los polifenoles extraídos mediante HPLC-DAD. Asimismo, el extracto optimizado se aplicó a un modelo experimental con animales.
Se asignaron 12 grupos (n =6) sometidos a isquemia intestinal (60 min) y reperfusión (3 ó 24 horas). El extracto optimizado se aplicó 24h antes de la cirugía, en el momento de la isquemia y al inicio del proceso de reperfusión. Se determinó el estrés oxidativo a través de la peroxidación de lípidos (MDA), la actividad enzimática de superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GPx) y marcadores de inflamación como IL-10 y TNF-α. Además, se realizó un estudio histológico e Inmunohistoquímico.
Los resultados obtenidos han mostrado que el extracto de Himanthalia elongata optimizado evita el daño generado por estrés oxidativo permitiendo que los grupos animales tratados muestren niveles enzimáticos normales en SOD, CAT y GPx independientemente del tiempo de aplicación, así como el resto de parámetros evaluados. Por otra parte, se ha demostrado que el empleo del extracto de Himanthalia elongata atenúa la lesión de la mucosa intestinal en el modelo de isquemia-reperfusión.
Por todo ello, podemos concluir que los resultados obtenidos de la aplicación del extracto de H. elongata son muy prometedores y podrían ser investigados en la prevención de la lesión por I/R intestinal.
SUMMARY The ischemia / reperfusion injury (I/R), is the interruption of the blood flow in a tissue for a period of time, followed by a restoration of it with the consequent formation of highly damaging oxygen free radicals. One of the most sensitive organs to this lesion is the intestine since it responds in a quick way, increasing its permeability.
Antioxidant therapies seem to inhibit the formation of free radicals, thus avoiding the organic deterioration caused by an excess of oxidative stress. Therefore, the search and application of natural antioxidants has gained special interest. In this sense, brown algae play an important role since they are the only organisms that produce phlorotannins, polyphenols that show an important antioxidant activity. Therefore, the antioxidant potential of Himanthalia elongata extract on intestinal ischemia-reperfusion injury has been investigated. Some variants that affect the extraction of polyphenols were optimized, such as: amount of algae, type of solvents, time and temperature of extraction. The content of total polyphenols and antioxidant activity were determined, as well as the identification and quantification of polyphenols extracted by HPLC-DAD. The optimized extract was also applied to an experimental model with animals.
Twelve groups (n = 6) were submitted to intestinal ischemia (60 min) and reperfusion (3 or 24 hours). The optimized extract was applied 24 hours before surgery, at the time of ischemia and at the beginning of the reperfusion process. Oxidative stress through lipid peroxidation (MDA), enzymatic activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) and inflammation markers such as IL-10 and TNF-a were determined. In addition, a histological and Immunohistochemical study was performed.
The results obtained have shown that the optimized Himanthalia elongata extract prevents the damage generated due to the oxidative stress allowing that the groups of animals treated show ordinary enzymatic levels related to SOD, CAT and GPx regardless of the application time, as well as the rest of parameters evaluated. On the other hand, it has been shown that the use of Himanthalia elongata extract attenuates the lesion of the intestinal mucosa in the ischemia-reperfusion model.
Therefore, we can conclude that the results obtained from the application of H. elongata extract are very promising and could be investigated in the prevention of intestinal I/ R injury.
