Tipificación molecular de mannheimia haemolytica y pasteurella multocida asociadas a la pasteurelosis neumónica ovina

• Autores: Andrés García Álvarez
• Directores de la Tesis: María Dolores Cid Vázquez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2018
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Francisco Fernández-Garayzábal Fernández (presid.), Ana Isabel Vela Alonso (secret.), María Jesús Alcalde Aldea (voc.), Miguel Blanco Álvarez (voc.), Joaquín María Rey Pérez (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Veterinaria por la Universidad Complutense de Madrid
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
      • Patología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense (pdf)
• Resumen
  • español

    La pasteurelosis neumónica es una de las enfermedades que tiene mayor impacto económico en la producción del ganado ovino en todo el mundo y una de las más importantes en la etapa neonatal. M. haemolytica y P. multocida son los principales agentes bacterianos asociados a estos procesos en los pequeños rumiantes. El objetivo principal de este estudio fue la caracterización genética de los aislados de M. haemolytica y P. multocida asociados a la pasteurelosis neumónica ovina con la finalidad de contribuir a la mejora del diagnóstico y del diseño de vacunas para la prevención de estos procesos en ovino. Para ello se utilizaron técnicas de tipificación molecular como el ¿multilocus sequence typing¿ (MLST), electroforesis de campo pulsado (PFGE) y los perfiles de virulencia. En los 121 aislados de M. haemolytica analizados se detectaron un total de 12 STs mediante MLST siendo los más frecuentes el ST16, ST28 y ST8. La amplia distribución de estos STs en los aislados de oveja unido a que estos STs no se han identificado en aislados bovinos, según la base de datos pública de MLST, sugiere la adaptación de ciertos linajes genéticas de M. haemolytica a pequeños rumiantes. Las diferencias en las frecuencias y distribución de ST entre aislados de pulmones con y sin lesiones neumónicas no fueron estadísticamente significativas. En general, la estructura poblacional observada mediante e-BURST se mantuvo en el análisis mediante neighbor-joining a partir de las secuencias concatenadas de los siete loci del esquema MLST donde la mayoría de los aislados se agruparon en dos grupos genéticos (Gg1 y Gg2). La diversidad genética observada por PFGE de los aislados procedentes de pulmones con lesiones neumónicas (DG 0,69) y los procedentes de pulmones sin lesiones neumónicas (DG 0,66) no mostró diferencias significativas. Tampoco se detectaron diferencias significativas en la frecuencia de los cinco perfiles de virulencia que incluyeron la mayoría de los aislados procedentes de lesiones neumónicas y los procedentes de pulmones sin lesiones, excepto el perfil 1 que fue significativamente más frecuente en los aislados no neumónicos. Estos resultados indican que las poblaciones de M. haemolytica procedentes de lesiones neumónicas y de pulmones sin lesiones son poblaciones genéticamente homogéneas y que son múltiples las cepas que pueden producir la lesión en los corderos. En los 43 aislados de P. multocida analizados se detectaron 16 STs por el esquema MLST Multi-host, siendo los más frecuentes ST50 y el ST19. En el análisis filogenético mediante el método neighbor-joining de las secuencias concatenadas de los 7 genes de los STs de la base de datos, al igual que en el análisis e-BURST, se detectaron dos grupos genéticos. Estos grupos genéticos incluían exclusivamente STs detectadas en rumiantes, mayoritariamente ovino, según la base de datos pública del MLST Multi-host, lo que sugiere una adaptación específica de estos grupos al ovino. Estos resultados se confirmaron utilizando el sistema MLST RIRDC de P. multocida. En función de la presencia o ausencia de los genes asociados a virulencia analizados en este estudio, los aislados se clasificaron en cinco perfiles de virulencia distintos, siendo el perfil tbpA+/toxA+ el más frecuente. La presencia del gen toxA en combinación con el tbpA, específico de rumiantes, y su asociación con el tipo capsular A, indican que estas cepas ovinas son genéticamente distintas de las cepas toxigénicas asociadas a la rinitis atrófica porcina. La presencia del antígeno de la toxina PMT se detectó en la mayoría de los aislados toxA positivos demostrando la capacidad toxigénica de estas cepas.

  • English

    Pneumonic pasteurellosis is one of the diseases that has the greatest economic impact on sheep production worldwide and one of the most important diseases in the neonates. M. haemolytica and P. multocida are the main bacterial agents associated with these processes in small ruminants. The main objective of this study was the genetic characterization of the isolates of M. haemolytica and P. multocida associated with the pneumonic lesions characteristic of the pneumonic pasteurellosis in sheep with the purpose of contributing to the improvement of the diagnosis and vaccine design for the prevention of these conditions in sheep. For this, molecular typing techniques such as "multilocus sequence typing" (MLST), pulsed field electrophoresis (PFGE) and virulence profile typing ("virulotyping") were used. In the 121 isolates of M. haemolytica analyzed a total of 12 STs were detected by MLST. The most frequent STs were ST16 (50/121, 41.3%), ST 28 (29/121, 24.0%) and ST8 (19/121, 15.7%). The differences in frequencies and distribution of ST between lung isolates with and without pneumonic lesions were not statistically significant (P> 0.05). These three TS represent 27% of the sheep isolates, ST16 and ST8 represent almost a third of the goat isolates included in the MLST database of M. haemolytica, which indicates a wide distribution of these genotypes in small ruminants. Furthermore, this, together with the fact that these STs have not been identified in bovine isolates, suggests the adaptation of certain genetic lineages of M. haemolytica to small ruminants...