Efectos sobre el ciclo celular de la expresión de isotipos de proteín fosfatasas 1 de ratón en schizosaccharomyces pombe

• Autores: Amaya Sangrador Vegas
• Directores de la Tesis: José Miguel Ortiz Melón (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Cantabria ( España ) en 1998
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Javier León Serrano (presid.), Isabel Andrés Cabrerizo (secret.), Joaquín Ariño Carmona (voc.), Juan Jiménez (voc.), Sergio Moreno Pérez (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • Ante la imposibilidad de conseguir la expresión de proteín fosfatasas tipo 1 (PP1) en vectores de expresión en células de mamífero, se ha utilizado la levadura S.

    pombe para expresar los isotipos dis2ml, dis2m2 y dis2m3de PP1 de ratón bajo el control del promotor regulable nmt1.

    son capaces de complementar el mututante de un gende fostasa tipo 1 de S. pombe dis2-11. En ausencia de tiamina se produce la sobrexpresión de los tres isotipos, puesta de manifiesto por Western blot, con un incremento de actividad fosfatasa de entre 10-20 veces respecto a la cepa salvaje. La sobreexpresión de los tres isotipos produce el mismo efecto letal, las células se alargan y se observan alteraciones en la distribución del DNA y formación del septo, indicativas de una mitosis y citoquinesis anómala.

    La sobre expresión de una versión truncada del isotipo dis2m2, al que le faltan 50 aa del extremo carboxilo terminal y que carece de actividad fosfatasa, reproduce el mismo fenotipo letal, indicando que este no se produce por un incremento de la actividad fosfatasa en la célula, sino que es debido a interacciones con otras proteínas de S. pombe. Para identificar proteínasesenciales de S.

    pombe capaces de revestir el efecto letal de las PP1 de mamífero, el integrante del isotipo dis2m3 se transformó con una libreria de S. pombe También se estudióla localización subcelular de la PP1 fusionada a una proteína fluorescente, y la fluorescencia se localiza en una estructura citoplásmica polar que podría tratarse del centrosoma.