Producción inducible de lactococina A, pediocina PA-1, colicina V e interleuquina-2 en cepas de "Lactococcus lactis" productoras de nisina

• Autores: Antonio Fernández Dumont
• Directores de la Tesis: Juan Miguel Rodríguez Gómez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Antonio Ordóñez Pereda (presid.), Leónides Fernández Álvarez (secret.), Eva Rodríguez Mínguez (voc.), Carmen Torres Manrique (voc.), Arjan Narbad (voc.)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen

  • En este trabajo se ha conseguido la producción de las bacteriocinas lactococina A, pediocina PA-1 y colicina V en Lactococcus lactis. Además, se ha conseguido la producción de una proteína eucariota, la citoquina interleuquina-2. Para ello, ha sido necesaria la introducción de tres genes: (a) un gen estructural híbrido con la fusión de las secuencias que codifican el líder de la lactococina A y el propéptido de interés (prolactococina A, propediocina PA-1, procolicina V o prointerleuquina-2) y (b) los genes lcnC y lcnD, que codifican el sistema de secreción y procesado de la lactococina A. Los genes estructurales híbridos estan controlados por el promotor inducible de la nisina (PnisA). Las cepas empleadas como hospedadoras fueron L. lactis FI5876, una cepa productora de nisina, y L. lactis FI7847, una cepa derivada que ha sufrido una delección que impide su expresión. La introducción de dos plásmidos compatibles en L. lactis FI7847 y FI5876 condujo a la obtención de nuevas cepas productoras de lactococina A, pediocina PA-1, colicina V o interleuquina-2. En consecuencia, se obtuvieron derivados de L. lactis FI5876 coproductores de lactococina A y nisina, pediocina PA-1 y nisina, colicina V y nisina e interleuquina-2 y nisina. La productividad de lactococina A y pediocina PA-1 superó notablemente a la obtenida previamente (Martínez, 1999) en sistemas afines de producción heteróloga que no utilizan el promotor inducible de la nisina. En el caso de la coproducción de colicina V y nisina, se trata de las primeras bacterias lácticas capaces de coproducir una bacteriocina que afecta a bacterias Gram-positivas (nisina) y otra que afecta a Gram-negativas (colicina V). Ninguno de los sobrenadantes obtenidos a partir de los lactococos recombinantes productores de bacteriocinas afectó a la proliferación de las células intestinales HT-29. Finalmente, la interleuquina-2 producida por los derivados de L. lactis FI7847 y FI5876 manifestó actividad biológica ya que inducía la proliferación de células CTLL-2.