Purificación y caracterización bioquímica de un factor de difusión presente en el veneno de la serpiente Bothrops atrox (Jergon)

• Édgar González ; César Ortiz ^[1] ; Gustavo Sandoval ^[1] ; Fanny Lazo ^[1] ; Julio Delgadillo ^[1] ; Edith Rodríguez ^[1] ; Ruperto Severino ^[2] ; Armando Yarlequé ^[1]
  1. [1] UNMSM Facultad de Ciencias Biológicas Laboratorio Biología Molecular
  2. [2] UNMSM Facultad de Ciencias Biológicas Laboratorio Zoología de Invertebrados
• Localización: Revista de la Sociedad Química del Perú, ISSN-e 2309-8740, ISSN 1810-634X, Vol. 79, Nº. 1, 2013, págs. 3-12
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Purification and biochemical characterization of a spreading factor from the venom of snake Bothrops atrox (Jergon)
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• Resumen
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    Se ha purificado un componente proteico de alto peso molecular del veneno de la serpiente peruana B. atrox, usando una cromatografía de intercambio aniónico sobre DEAE Sephadex A-50 y una filtración molecular sobre Sephadex G-50, utilizando en ambos casos buffer acetato de amonio 0,05M pH 5,0. El análisis enzimático mostró que se trata de una proteína con actividad de hialuronidasa la cual fue purificada 145 veces con un rendimiento de 72% y una recuperación de proteína activa de 0,5%. La enzima registró un peso molecular de 110 kDa por PAGE-SDS, en condiciones reductoras y no reductoras. Los ensayos de estabilidad indicaron que la hialuronidasa perdió el 60% de su actividad después de 150 horas a pH 5,0 y fue rápidamente inactivada por tratamiento térmico mayor a 40 °C. El pH óptimo de la enzima fue de 6 y la proteína sólo mostró actividad sobre ácido hialurónico y no sobre condroitin sulfato. Los ensayos con inhibidores, tales como TLCK, yodoacetato y dexametasona 5mM, produjeron pérdida de la actividad equivalentes a 60, 40 y 75%, respectivamente, en tanto que el tratamiento con suero sanguíneo humano la inactivó totalmente. Asímismo, las pruebas en placa de hemólisis conteniendo ácido hialurónico mostraron que la enzima es capaz de incrementar el área hemolítica. Adicionalmente, la preincubación de la enzima con los antivenenos comerciales lachésico y botrópico, así como el antiveneno experimental botrópico IgY, revelaron una elevada capacidad inhibitoria de tales antivenenos.

  • English

    A protein of high molecular weight was purified from the venom of Bothrops atrox Peruvian snake, using DEAE Sephadex A-50 anion exchange chromatography and Sephadex G-50 gel molecular filtration, with 0,05M ammonium acetate, pH 5.0. It showed hyaluronidase activity, and was obtained until homogeneous state with a 145-fold, 72% of yield and a 0.5% of recovery of active protein. The enzyme showed a molecular weight of 110 kDa by SDS- PAGE under reducing and non reducing conditions. The stability assays indicated that hyaluronidase lost 60% of its activity after 150 hours at pH 5.0 and it was quickly inactivated by heat treatment above 40 ºC. The optimum pH was 6.0 using hyaluronic acid and some inhibitors such as TLCK, iodoacetate and dexamethasone (5 mM), caused 60, 40 and 75% of inactivation, respectively. On the other hand, this enzyme is capable to increase hemolysis into agar plates. Furthermore, treatment of the enzyme with human blood-serum, as well as lachesic and bothropic commercial antivenoms produced a strong inhibition; also, IgY experimental antivenom revealed high inhibition of this enzyme.