Resumen de Characterization of protease activities in a crude extract of germinated cacao

M.L. Sánchez Mundo, C Bautista-Muñoz, M. E. Jaramillo-Flores

• español

  La dispersión dinámica de luz (DLS) fue aplicada para el análisis de la distribución de diámetros hidrodinámicos de proteínas en un extracto germinado de cacao. Se evaluaron las interacciones con cationes divalentes y su relación con la actividad de la enzima Xaa-prolyl dipeptidyl aminopeptidasa 2 (Xaa-Pro-DAP2). Las peptidasas fueron aisladas de los extractos cetónicos de semillas de cacao germinadas, por precipitación con sulfato de amonio al 80% de saturación. Los resultados mostraron una alta actividad de Xaa-Pro-DAP2, además de las enzimas de aminopeptidasa (APE) y carboxipeptidasa (CP). De acuerdo con el análisis DLS, la distribución de tamaños es multi-modal con diámetros hidrodinámicos de 158.5 y 119 nm, respectivamente. La distribución permaneció constante desde 60°C hasta 80°C, sugiriendo estabilidad térmica relacionada con el incremento de la actividad de Xaa-Pro-DAP2 y la baja agregación de proteínas. La actividad de APE fue ligeramente activada por Co2+ a 1 mM, mientras que no se observó efecto importante sobre la actividad de CP.

• English

  Dynamic light scattering (DLS) was applied to the analysis of the hydrodynamic diameter distribution of proteins in extract of germinated cacao. The interactions among divalent cations and their relation with the activity of Xaa-prolyl dipeptidyl aminopeptidase 2 (Xaa-Pro-DAP2) enzyme were evaluated. The peptidases were isolated by 80% saturation of ammonium sulfate from acetone extract of germinated cacao seeds. The results showed a higher activity of Xaa-Pro-DAP2, besides aminopeptidase (APE) and carboxypeptidase (CP) enzymes. Using DLS analysis the size distribution was found to be multi-modal; however with Cu2+ and Cd2+ at 1 mM, the size distribution was found to be monomodal with a hydrodynamic diameter of 158.5 and 119 nm, respectively. The distribution remained constant from 60 to 80°C, suggesting that thermal stability is related to increase in Xaa-Pro-DAP2 activity an lower protein aggregation. APE activity was slightly activated by Co2+ at 1 mM, whereas no significant effect was observed on CP activity.