Avaliação de protocolos de extração de DNA genômico na verificação da presença de Listeria monocytogenes por PCR

• Monteiro, Francielli Casanova ^[1] ; Montanhini, Maike Taís Maziero ^[1] ; Bittencourt, Juliana Vitoria Messias ^[1]
  1. [1] Universidade Tecnológica Federal do Paraná

     Universidade Tecnológica Federal do Paraná

     Brasil

     
• Localización: Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal: RBHSA, ISSN-e 1981-2965, Vol. 8, Nº. 4, 2014, págs. 141-156
• Idioma: portugués
• Títulos paralelos:
  • Evaluation of protocols for genomic DNA extration of the verification of Listeria monocytogenes presence by PCR
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• Resumen
  • English

    Listeria monocytogenes is a pathogen transmitted by foods that can cause serious illness, especially in immunocompromised individuals. The rapid and accurate identification of these bacteria in foods is a great ally in preventing its transmission. The molecular methods have proven to be effective for that; however, is still difficult to determine the optimal DNA extraction technique based on the characteristics of each microorganism. The efficiency of PCR depends on satisfactory amounts and quality of DNA. This study aimed to evaluate two DNA extraction techniques, CTAB detergent and thermal lysis. Four strains of L. monocytogenes were used, one ATCC 19117 and three isolated industrial environment (thinning of a slaughterhouse), previously identified by conventional methods and confirmed by molecular methods. The extraction by thermal lysis showed satisfactory results, providing visualization of visible bands and without interfering in the PCR reaction.

    The thermal lysis proved to be an adequate extraction protocol, as well as providing the amounts and quality of DNA required for the amplification, being simple, fast and an inexpensive technique.

  • português

    Listeria monocytogenes é um patógeno transmitido por alimentos que pode causar sérias doenças, principalmente em indivíduos imunodeprimidos. A identificação rápida e precisa desta bactéria nos alimentos é uma grande aliada na prevenção da sua transmissão. Os métodos moleculares têm se mostrado efetivos no que se refere a estes quesitos, no entanto, ainda é difícil determinar a melhor técnica de extração do DNA em função das características de cada micro-organismo. A eficiência da PCR depende de DNA em quantidade e qualidade satisfatórios. O presente trabalho teve por objetivo avaliar duas técnicas de extração de DNA, uma por detergente CTAB e outra por lise térmica. Foram utilizadas quatro cepas de L. monocytogenes, sendo uma ATCC 19117 e três isoladas de ambiente industrial (ralos de um frigorífico), previamente identificadas por métodos convencionais e confirmadas por métodos moleculares. A extração por lise térmica apresentou resultados satisfatórios, proporcionando a visualização de bandas visíveis e sem interferentes na reação de PCR. A lise térmica mostrou-se um bom protocolo de extração, pois além de fornecer DNA na quantidade e qualidade necessária para a amplificação, é uma técnica simples, rápida e barata. Palavras-chave: Métodos moleculares; microbiologia; detergente CTAB; lise térmica.