Resumen de Caracterización bioquímica de AmiJ33, una amilasa de Bacillus amyloliquefaciens aislada de suelos cultivados con caña de azúcar en la región del Papaloapan

J. J. Montor Antonio, C. Olvera Carranza, D. Reyes Duarte, B. Sachman Ruiz, L. Ramírez Coutiño, S. Del Moral

• español

  La amilasa (E.C. 3.2.1.1) de Bacillus amyloliquefaciens JJC33M (AmiJ33) fue producida por fermentacion sumergida. Se probo el efecto de peptona, extracto de levadura, Ca+2 y glicina en la produccion de AmiJ33. El extracto de levadura y Ca+2 tuvieron un efecto positivo sobre la sintesis de AmiJ33. La enzima fue recuperada mediante precipitacion a saturacion al 60% con (NH4)2SO4. El peso molecular aproximado de la enzima purificada fue de 50 kDa. Asi mismo, se evaluo el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimatica, concluyendo que los valores mas altos de actividad se observaron a pH 6.0 y 80¢XC, respectivamente. En condiciones ligeramente acidas (pH 4.0 y 5.0), AmiJ33 mantuvo el 72% de su actividad. AmiJ33 fue estable por 3 h a 40¢XC, y por 30 min a 45 y 50¢XC, conservando el 88 y 82% de actividad residual. A 60¢XC, la actividad disminuyo 40%. La actividad de AmiJ33 se incremento 50.27% con �Ò-mercaptoetanol, no fue inhibida por EDTA y se inhibio totalmente con SDS.

• English

  Amylase (EC 3.2.1.1) from Bacillus amyloliquefaciens JJC33M (AmiJ33) was produced by submerged fermentation. Peptone, yeast extract, Ca+2 and the glycine effect over AmiJ33 production was analyzed shown that yeast extract and Ca+2 concentration increased in 2.5 times the AmiJ33 production. By mean precipitation using (NH4)2SO4, the enzyme was recovered and the protein was identified by SDS-PAGE demonstrating that AmiJ33 has a molecular weight of 50 kDa. Temperature and pH optimus were determined, the highest values of activity were observed at pH 6.0 and 80° C, however, using slightly acid conditions (pH 4.0 and 5.0) AmiJ33 kept 72% of activity. AmiJ33 was stable for 3 h at 40°C, and 30 min at 45-50° C, retaining 88 and 82% of residual activity respectively. At 60°C, the enzyme activity decreased 40%. The divalent ions increased slightly AmiJ33 activity, however EDTA did not inhibit its activity, while SDS inhibited it completely.