Caracterización bioquímica de AmiJ33, una amilasa de Bacillus amyloliquefaciens aislada de suelos cultivados con caña de azúcar en la región del Papaloapan

• Autores: J. J. Montor Antonio, C. Olvera Carranza, D. Reyes Duarte, B. Sachman Ruiz, L. Ramírez Coutiño, S. Del Moral
• Localización: Nova scientia, ISSN-e 2007-0705, Vol. 6, Nº. 12, 2014, págs. 39-59
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Biochemical characterization of AmiJ33 an amylase from Bacillus amyloliquefaciens isolated of sugarcane soils at the Papaloapan region
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    La amilasa (E.C. 3.2.1.1) de Bacillus amyloliquefaciens JJC33M (AmiJ33) fue producida por fermentacion sumergida. Se probo el efecto de peptona, extracto de levadura, Ca+2 y glicina en la produccion de AmiJ33. El extracto de levadura y Ca+2 tuvieron un efecto positivo sobre la sintesis de AmiJ33. La enzima fue recuperada mediante precipitacion a saturacion al 60% con (NH4)2SO4. El peso molecular aproximado de la enzima purificada fue de 50 kDa. Asi mismo, se evaluo el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimatica, concluyendo que los valores mas altos de actividad se observaron a pH 6.0 y 80¢XC, respectivamente. En condiciones ligeramente acidas (pH 4.0 y 5.0), AmiJ33 mantuvo el 72% de su actividad. AmiJ33 fue estable por 3 h a 40¢XC, y por 30 min a 45 y 50¢XC, conservando el 88 y 82% de actividad residual. A 60¢XC, la actividad disminuyo 40%. La actividad de AmiJ33 se incremento 50.27% con �Ò-mercaptoetanol, no fue inhibida por EDTA y se inhibio totalmente con SDS.

  • English

    Amylase (EC 3.2.1.1) from Bacillus amyloliquefaciens JJC33M (AmiJ33) was produced by submerged fermentation. Peptone, yeast extract, Ca+2 and the glycine effect over AmiJ33 production was analyzed shown that yeast extract and Ca+2 concentration increased in 2.5 times the AmiJ33 production. By mean precipitation using (NH4)2SO4, the enzyme was recovered and the protein was identified by SDS-PAGE demonstrating that AmiJ33 has a molecular weight of 50 kDa. Temperature and pH optimus were determined, the highest values of activity were observed at pH 6.0 and 80° C, however, using slightly acid conditions (pH 4.0 and 5.0) AmiJ33 kept 72% of activity. AmiJ33 was stable for 3 h at 40°C, and 30 min at 45-50° C, retaining 88 and 82% of residual activity respectively. At 60°C, the enzyme activity decreased 40%. The divalent ions increased slightly AmiJ33 activity, however EDTA did not inhibit its activity, while SDS inhibited it completely.