Estudios sobre terapia fágica contra S. enterica en Gallus gallus
- Autores: Carlota Bardina Fons
- Directores de la Tesis: Montserrat Llagostera Casas (dir. tes.), Pilar Cortés Garmendia (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Jordi Barbé García (presid.), María Teresa Muniesa Pérez (secret.), Juan Evaristo Suarez Fernandez (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Resumen
Salmonella enterica es una enterobacteria zoonótica que reside en el intestino de los animales. Normalmente genera infecciones asintomáticas en animales de granja. Las serovariedades no tifoideas causan brotes asociados a alimentos siendo S. Enteritidis y S. Typhimurium las que presentan una mayor prevalencia a nivel mundial. La principal vía de transmisión de este patógeno a humanos se produce a través del consumo de alimentos contaminados de origen animal. Es por ello que, actualmente, se está promoviendo una actuación integrada en todos los niveles de la cadena alimentaria bajo el lema “de la granja a la mesa”. El principal reservorio de S. enterica son las especies aviares y en particular Gallus gallus. Por ello, la Unión Europea (UE) ha publicado una serie de regulaciones para intentar disminuir, sobretodo en Gallus gallus, la prevalencia de las principales serovariedades de Salmonella como S. Enteritidis y S. Typhimurium. No obstante, dado que con el uso de las medidas utilizadas hasta el momento no han permitido llegar al objetivo, se presenta una clara necesidad de disponer de nuevas herramientas para reducir la presencia de Salmonella en todo el sector de producción aviar. Por ello, el objetivo del presente trabajo ha sido aislar, seleccionar y caracterizar fagos de Salmonella, para estudiar su aplicación en Gallus gallus. Para abordar el objetivo propuesto, se aislaron bacteriófagos específicos de Salmonella, seleccionándose aquellos que presentaron mejores perfiles líticos, rango de huésped y cinética de infección sobre S. Typhimurium ATCC 14028 y S. Enteritidis LK5. Tras estosestudios, se escogieron a los fagos UAB_Phi20 y UAB_Phi87 como candidatos para terapia fágica y se procedió a su caracterización biológica y molecular. El estudio de estos parámetros indicó que el fago UAB_Phi20 pertenece a la familia Podoviridae y al grupo de fagos tipo P22, mientras el fago UAB_Phi87 es de la familia Myoviridae y del grupo de fagos tipo Felix O1. Ambos fagos presentaron una buena estabilidad a distintas temperaturas y pH, si bien su título disminuye significativamente a pH 2. El análisis de las secuencias de ambos fagos indicó que ninguno de ellos contiene genes de virulencia conocidos. Asimismo, se demostró in vitro que la acción combinada de ambos fagos, junto con el fago UAB_Phi78, provoca una mayor reducción de la concentración de Salmonella que la de los fagos individuales. La experimentación animal, realizada en un modelo murino y en Gallus gallus, demostró el corto tiempo de residencia de los fagos en el tracto intestinal de los animales y la necesidad de administrar repetidas dosis fágicas para conseguir un efecto significativo en la reducción de este patógeno. Así, se consiguió que el 50% de los ratones sobreviviera a la infección promovida por S. Typhimurium ATCC 14028 al administrar 1010 pfu/animal simultáneamente a la infección y a las 6, 24 y 30 horas después de la infección. Del mismo modo, en pollos infectados con S. Typhimurium y tratados con dos dosis diarias de 1010 pfu/animal el dia previo a la infección y los 4 días siguientes, junto con la readministración del cóctel en los días 6, 8, 10, 13 y 15 posinfección, produjo una reducción de Salmonella de más de 4 logaritmos durante los dos primeros días de la infección y de 1,5 logaritmos al final del experimento. Finalmente, dado que algunas de las problemáticas que se plantean ante el uso de bacteriófagos en terapia fágica son la selección de bacterias resistentes y la generación de una respuesta inmunitaria que bloquee la acción de los fagos, se estudió el impacto de dicho cóctel en la selección de bacterias resistentes en los animales tratados con fagos y se cuantificó su respuesta inmunitaria.
