Desarrollo y efecto antitumoral de vacunas génicas celulares y silenciamiento génico
- Autores: Antonio Miguel Matas
- Directores de la Tesis: María José Herrero Cervera (dir. tes.), Salvador Francisco Aliño Pellicer (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2015
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Carlos Julián Ciudad i Gómez (presid.), Rafael Botella Estrada (secret.), Adelaida García Gimeno (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: RODERIC
- Resumen
La presente tesis utiliza las vacunas antitumorales basadas en células modificadas genéticamente como principal estrategia para intentar lograr una respuesta inmune antitumoral eficaz. La vacunación preventiva con células tumorales modificadas genéticamente ha logrado muy buenos resultados en ratones consiguiendo la inhibición del crecimiento tumoral y la supervivencia final de los mismos. Sin embargo, en la clínica la disponibilidad de ciertas células tumorales es muy baja y su transfección es poco reproducible. Por ello, en esta tesis se plantea como uno de los objetivos principales desarrollar y evaluar el efecto antitumoral de vacunas basadas en complejos celulares formados por células tumorales y fibroblastos modificados genéticamente, ya que éstos son de fácil obtención y su transfección es bastante reproducible. Por otra parte, la vacunación terapéutica con células modificadas genéticamente ha alcanzado éxitos parciales, logrando por lo general retrasar el crecimiento tumoral y alargar la vida de los animales. Esta baja eficacia observada en la vacunación terapéutica parece estar relacionada con la instauración de una respuesta inmunosupresora. Las principales células implicadas en esta respuesta supresora son las células Treg, las cuales expresan constitutivamente la molécula de superficie CTLA4 y el factor de transcripción Foxp3, ambas con actividad inmunosupresora. Por ello, el segundo objetivo principal de esta tesis es evaluar el efecto antitumoral de una vacunación terapéutica con células tumorales B16 modificadas con el gen de GM-CSF combinada con el silenciamiento génico de las moléculas CTLA4 y Foxp3. Para silenciar estos genes se han utilizado oligonuleótidos antisentido (ASO) 2-OMe-fosforotioatos y Polypurine Reverse Hoogsteen (PPRH). Nuestros resultados indican que: 1) es posible desarrollar una vacuna preventiva basada en complejos celulares entre células B16 (melanoma) y fibroblastos modificados con el gen de GM-CSF capaces de generar una respuesta inmune humoral frente al tumor similar a la de las B16 modificadas genéticamente; 2) los ASO 2-OMe-fosforotioatos y los PPRH utilizados a una concentración de 1µM y 100µM respectivamente, fueron capaces de entrar en un 60% de linfocitos de ratón; 3) en ausencia de vectores de transferencia, en las condiciones estudiadas los ASO mostraron ser farmacológicamente más eficaces y más potentes que los PPRH en el silenciamiento de los genes CTLA4, CD25 y Foxp3; 4) la expresión temprana (días 2 y 5 tras implantación del tumor) de los genes CTLA4 y Foxp3 resultó estar relacionada con el desarrollo del tumor; 5) en cuanto al efecto antitumoral; a) en la vacunación preventiva los mejores resultados se observaron en el grupo vacunado con células B16 libres modificadas con el gen GM-CSF, logrando un 40% de supervivencia; b) en la vacunación terapéutica más silenciamiento génico, los mejores resultados se alcanzaron en los grupos vacunado con células B16 modificadas con el gen de GM-CSF y el silenciamiento con ASO anti-CTLA4 (logró un 20% de supervivencia) y con ASO anti-Foxp3 (logró un 40% de supervivencia). Nuestros resultados ponen de manifiesto que el silenciamiento génico de moléculas inmunosupresoras como CTLA4 y Foxp3 es una alternativa terapéutica al uso de anticuerpos en cáncer, ya que aumenta la respuesta antitumoral de las vacunas, evita los efectos adversos de los anticuerpos y permite el bloqueo de moléculas intracelulares.
