La infección persistente por el virus de la hepatitis C (VHC) altera la reactividad de las células citotóxicas VHC específicas mediante el desequilibrio entre Mcl-1 y Bim debido a la disminución de la expresión de CD127

• Autores: Megha Uttam Lokhande
• Directores de la Tesis: Juan Ramón Larrubia Marfil (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Alcalá ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Agustín Albillos Martínez (presid.), Melchor Álvarez de Mon Soto (secret.), José Antonio Solis Herrero (voc.), José María Ladero Quesada (voc.), Conrado M. Fernández Rodriguez (voc.)
• Materias:
  • Ciencias médicas
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  e_Buah  TESEO 
• Resumen
  • español

    Antecedentes: En la infección persistente por virus de la hepatitis C (VHC), la reactividad de los linfocitos T citotóxicos (LTC) se encuentra alterada y esto afecta al control del VHC. La expresión del receptor de la interleuquina-7 (CD127) en estas células podría regular la reactividad de los LTC a través de la modulación del equilibrio entre Bim/Mcl-1. Bim es una molécula proapotótica bloqueada por la acción de Mcl-1. La expresión de Bim/Mcl-1 y la reactividad de los LTC VHC-específicos se compararon en relación al fenotipo CD127.

    Material y Métodos: Se obtuvieron linfocitos de sangre periférica (LSP) de pacientes HLA-A2+ VHC+. Los LTC VHC-específicos se visualizaron mediante tinción de los LSP con Ac-anti CD8 y complejos pentaméricos HLAA2/péptido (pentámeros). El fenotipo Mcl-1/Bim/CD127/IFN-! en los LTC VHC-específicos se analizó mediante tinción de las células CD8+/pentámero+ detectables con Ac anti Mcl-1/Bim/CD127/IFN-!. La capacidad proliferativa invitro tras estimulación específica de los LTC VHC específicos se evalúo en presencia y ausencia del inhibidor z-VAD-fmk. Todas las células marcadas se analizaron mediante citometría de flujo.

    Resultados: Los LTC VHC-específicos con fenotipo CD127 bajo se asociaron a elevada viremia del VHC, mientras que las células fenotipo CD127alto se correlacionaron con carga viral indetectable (P < 0.001). Directamente ex vivo, la frecuencia de células pentámero+ fue similar en los grupos con expresión alta y baja de CD127. Sin embargo, la capacidad prolierativa tras estimulación antígeno-específica se encontraba alterada en el grupo con expresión CD127bajo (P<0.05), aunque esto se corrigió mediante tratamiento con z-VAD-fmk (P<0.05). La expresión de Mcl-1 directamente ex vivo fue baja (P<0.01) y la expresión de Bim aumentó tras el encuentro antigénico en las células con fenotipo CD127bajo (P<0.05). La diferencia ex vivo entre la expresión de Mcl-1 y Bim en las células pentámero+ se correlacionó directamente con la expresión de CD127 (P<0.001) y con la reactividad de las células pentámero+ (P<0.05). La frecuencia de células productoras de IFN-! directamente ex vivo fue menor en las células CD127bajo que en las CD127alto (P<0.05).

    Conclusiones: Un expresión baja ex vivo de Mcl-1 y una sobre-expresión de Bim tras el encuentro antigénico se encuentran involucradas en la hiporeactividad de los LTC-VHC-específicos con baja expresión de CD127 durante la infección crónica, aunque esto puede ser superado mediante el bloqueo de la apoptosis.

  • English

    Background: In persistent hepatitis C virus (HCV) infection, HCV-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) reactivity is impaired and this affects HCV control. Interleukin-7 receptor (CD127) expression on these cells could regulate CTL reactivity through Mcl-1/Bim balance modulation. Bim is a proapoptotic molecule blocked by the action of Mcl-1. Mcl-1/Bim expression and T cell reactivity on HCV-specific CTLs were compared according to CD127 phenotype.

    Materials and Methods: Peripheral blood lymphocytes (PBL) from HLA-A2+ HCV+ patients were obtained. HCV-specific CTLs were visualized by staining PBL with anti-CD8 and HLA-A2/peptide pentameric complexes (pentamer). Mcl-1/Bim/CD127/IFN-! phenotype of HCV-specific CTLs was tested by staining detectable CD8+/pentamer+ cells with anti-Mcl-1/Bim/CD127/IFN-! antibodies. HCV-specific CTL proliferation ability after specific in vitro challenge was tested in the presence and absence of pancaspase inhibitor z-VAD-fmk. All stained cells were analyzed by flow cytometry.

    Results: CD127low-expressing HCV-specific CTLs associated with high HCV viraemia, while CD127high correlated with undetectable viral loads (P < 0.001). Directly ex vivo, pentamer+ cell frequency was similar according to CD127 expression level. Nevertheless, CD127low pentamer+ cell proliferation after specific in vitro challenge was impaired (P < 0.05), although this was corrected by z-VAD-fmk treatment (P < 0.05). Mcl-1 expression was low directly ex vivo (P < 0.01), and Bim was up regulated after antigen encounter (P < 0.05) of CD127low pentamer+ cells. The ex vivo difference between Mcl-1 and Bim expression on pentamer+ cells correlated positively with CD127 expression level (P < 0.001) and with pentamer+ cell reactivity (P < 0.05). The frequency directly ex vivo of IFN-!-producing pentamer+ cells was lower in CD127low group than in CD127high group (P<0.05).

    Conclusion: A low ex vivo Mcl-1 expression and Bim up-regulation after antigen encounter are involved in CD127low HCV-specific CTL hyporeactivity during chronic infection, but it can be overcome by apoptosis blockade.