Tipificación del fenotipo inflamatorio en el asma bronquial en niños de 7 a 14 años, mediante recuento celular y determinación de citoquinas en esputo inducido
- Autores: Gerardo Vizmanos Lamotte
- Directores de la Tesis: Antonio Carrascosa Lezcano (dir. tes.), Antonio Moreno Galdó (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2010
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Ricardo Closa Monasterolo (presid.), Félix Castillo Salinas (secret.), Eduardo González Pérez-Yarza (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: DDD
- Resumen
Introducción: La inducción de esputo es una técnica escasamente invasora para el estudio y la monitorización de la inflamación de la vía aérea. Objetivos: El objetivo principal del estudio fue comparar el perfil celular y los niveles de citoquinas Th1 y Th2 en esputo inducido entre niños asmáticos atópicos, asmáticos no atópicos y sanos. Métodos: La inducción de esputo fue realizada mediante inhalación de suero salino hipertónico a concentraciones crecientes (3%, 4% y 5%). Se determinó la fracción exhalada de óxido nítrico en los pacientes asmáticos y se midió la FEV1 al inicio y después de cada período de inhalación para garantizar la seguridad de los niños. El procesado del esputo se hizo siguiendo el método de Pizzichini y cols. Se separó el esputo de la saliva y se añadió un volumen de solución de ditiotreitol igual a 4 veces el peso del esputo. Se agitó la mezcla y después de colocarla en banco mecedor durante 10 minutos se añadieron 4 volúmenes de PBS de Dulbecco. La suspensión resultante se filtró a través de una gasa de nylon de 48 micras, centrifugándose a continuación durante 10 minutos a 2.500 rpm para obtener un pellet (sedimento) celular donde se determinaron el recuento celular total y la viabilidad celular y un sobrenadante que se guardó a -80ºC para la determinación de citoquinas. Se consideró una buena muestra si la viabilidad celular era > 60% y la contaminación por células escamosas < 20%. Mediante citocentrífuga se obtuvieron las preparaciones y tras tinción de May-Grünwald-Giemsa se realizó el recuento celular diferencial con microscopio óptico. Los niveles de IFN-gamma, IL-2, IL-10, IL-8, IL-6, IL-4, IL-5, IL-1beta, TNF-alfa, e IL-12p70 en el sobrenadante se determinaron mediante citometría de flujo (Bender Medsystem, USA). El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS15.0. Se aplicaron los siguientes tests paramétricos o no paramétricos según los grupos seguían o no una distribución normal (prueba de normalidad de Kolmogorow-Smirnov), y según fuera apropiado: t de Student para datos no apareados, análisis de la varianza de una vía, test no paramétricos de la U de Mann-Witney, y de Kruskal-Wallis, Chi-cuadrado, prueba exacta de Fisher y correlación lineal de Pearson. Se consideraron significativos valores de p < 0,05. Los resultados se expresaron como media y desviación estándar (DE) o mediana y rango intercuartílico. Resultados: Se realizó inducción de esputo a 77 niños asmáticos (52 varones) y a 31 sanos (17 varones) de 7 a 15 años. Entre los asmáticos, 51 no recibían tratamiento y 26 recibían corticoides inhalados. Diecisiete pacientes presentaban un asma no atópica y 60 asma atópica. Se obtuvieron 64 muestras en los asmáticos (83,1% de las inducciones) y 24 muestras en los niños sanos (77,4%) de las que 49 y 18 adecuadas respectivamente. La mediana de eosinófilos en esputo inducido de los asmáticos atópicos (1,5%) fue mayor que en los no atópicos (0%) (p=0,02) y que en los niños sanos (0%) (p=0,003). Las citoquinas Th2 (IL-4 e IL-5) y Th1 (IFNgamma, IL-2 e IL-12p70) fueron superiores en los asmáticos atópicos que en los sanos y en los asmáticos no atópicos (p<0,0001). La IL-8 fue mayor en los niños asmáticos (atópicos y no atópicos) que en los controles (p<0,0001). La IL-10 fue mayor en los controles que en los asmáticos atópicos (p=0,03). No existieron diferencias en el resto de citoquinas (IL-6, IL-1beta y TNF-alfa). Conclusiones: El perfil inflamatorio de los niños asmáticos muestra un aumento en las citoquinas proinflamatorias en el esputo inducido respecto a los niños sanos. Existen diferencias en el perfil de citoquinas en esputo inducido entre los niños asmáticos atópicos y no atópicos.
