Estudios estructurales de las proteínas de hemidesmosomas: integrina ?6?4 y tetraspanina cd151

• Autores: Noelia Alonso García
• Directores de la Tesis: José María de Pereda Vega (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Salamanca ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: German Alejandro Rivas Caballero (presid.), Mónica Balsera (secret.), María Begoña García Álvarez (voc.), Jerónimo Bravo Sicilia (voc.), Julián Gómez Gutiérrez (voc.)
• Materias:
  • Física
    • Física del estado sólido
      • Cristalografía
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: GREDOS
• Resumen

  • [ES]Se ha avanzado conocimiento de la organización de los hemidesmosomas mediante la caracterización estructural de dos proteínas de hemidesmosomas: integrina ¿6ß4 y la tetraspanina CD151. Para ello, se resolvió la estructura cristalográfica de tres dominios de la región citoplasmática de ß4 (calx-ß, FnIII-3 y FnIII-4) y se purificó el dominio extracelular de CD151 implicado en la interacción con integrinas. Se determinaron dos estructuras adicionales del dominio Calx-ß de ß4 usando cristales crecidos en presencia de Ca2+ y cristales crecidos en ausencia de calcio pero incubados CaCl2. En ninguno de los casos se observó unión del catión al dominio de ß4. También se analizó la posible unión de Ca2+ al dominio Calx-ß de ß4 en solución: se midió directamente el Ca2+ unido mediante diálisis de equilibrio combinada con la determinación de Ca2+ por ICP-OES y se analizó el efecto del Ca2+ en la estabilidad térmica del dominio Calx-ß de ß4 empleando un ensayo basado en fluorescencia. Los dominios FnIII-3 y FnIII-4 se encuentran separados por una región de aproximadamente 20 residuos. Experimentos de SAXS indican que la región FnIII-3,4 tiene forma compacta y plana, ligeramente alabeada. Mediante SDSL combinado con EPR-DEER, se pudo conocer la orientación relativa de estos dos dominios FnIII en la región FnIII-3,4. El dominio EC2 de la tetraspanina CD151 (implicado en la interacción con integrinas) se expresó a partir de células de insecto. Esto permitió la purificación de esta región así como su caracterización estructural.