Utilidad del genotipado PCR-RFLP (coa-spa-clfB) como herramienta epidemiológica en el estudio de "Staphylococcus aureus"

• Autores: Isabel Aleixandre Gorriz
• Directores de la Tesis: Victoria Domínguez Márquez (dir. tes.), Antonio Guerrero Espejo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad CEU - Cardenal Herrera ( España ) en 2012
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Rafael Borrás Salvador (presid.), David Viana Martín (secret.), Sara Esteve Poblador (voc.), Rosario Moreno Muñoz (voc.), Maria del Remedio Guna Serrano (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
  • Ciencias médicas
    • Salud publica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Repositorio Institucional CEU
• Resumen

  • UTILIDAD DEL GENOTIPADO PCR-RFLP (coa-spa-clfB) COMO HERRAMIENTA EPIDEMIOLÓGICA EN EL ESTUDIO DE Staphylococcus aureus Las infecciones nosocomiales causadas por cepas de Staphylococcus aureus meticilin resistentes (SARM), son un problema de salud importante en todo el mundo. Las técnicas de tipificación molecular, permiten conocer el origen y las vías de diseminación de este microorganismo en caso de brote, por lo que se han introducido en las investigaciones epidemiológicas. Los objetivos de este estudio se centraron en conocer el porcentaje de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina, en el Departamento de Salud de la Ribera durante el periodo de marzo de 2007 a septiembre de 2008, así como en estudiar la existencia de Leucocidina de Panton Valentine en una selección de aislados de S. aureus de origen comunitario. Se evaluó, además, la utilidad del genotipado mediante PCR-RFLP a partir de 3 genes distintos - coa (coagulasa), spa (proteína A), clfB (clumping factor B) - como herramienta de análisis epidemiológico, comparando los resultados obtenidos con este genotipado con el método de referencia (PFGE): Electroforesis de Fragmentos de Restricción en Campo. El poder discriminatorio y la concordancia existente entre ambos marcadores epidemiológicos, avalan la utilidad del genotipado por PCR-RFLP en la detección de clonalidad de un brote por SARM. Conclusiones 1. El porcentaje de aislados clínicos de S. aureus resistentes a meticilina en un Departamento de Salud puede llegar a duplicarse por la aparición de brotes. 2. La detección del gen mecA mediante PCR, demostró la presencia de dos cepas portadoras del gen con fenotipo sensible, conocidas como OS-SARM. Sin embargo, consideramos que los estudios de sensibilidad a meticilina realizados de rutina en nuestro laboratorio, resultan adecuados en la práctica clínica; dado el bajo número de discrepancias observadas. 3. La prevalencia de cepas productoras de Leucocidina de Panton Valentine fue del 1,8% y se asociaron a infecciones de piel y partes blandas de origen comunitario. 4. El método de PCR-RFLP de los genes coa-spa-clfB resulta una técnica asequible, de fácil realización e interpretación, que ofrece un nivel de discriminación suficiente para ser utilizado como método de tipado. 5. El índice de Simpson demostrado por el método PCR-RFLP (coaspa- clfB) fue de 0,979; equiparable al 0,989 obtenido por PFGE, lo que avala su utilidad como herramienta de análisis epidemiológico. 6. Los problemas de tipabilidad observados para el gen clfB, limitan su utilización y aconsejan el diseño de nuevas dianas para su estudio. El índice de Simpson utilizando los datos de PCR-RFLP de coa-spa fue del 0,968; por encima del 0,950 considerado como mínimo deseable; y supone una alternativa válida en el estudio de un brote. Conclusiones 146 7. El nivel de concordancia entre PCR-RFLP (coa-spa-clfB) y PFGE, en el análisis de las muestras del Servicio de Medicina Intensiva del HUR, fue muy bueno con un valor Kappa de 0,887±0,109. 8. El genotipado mediante PCR-RFLP (coa-spa-clfB) puede demostrar la clonalidad de brotes en servicios asistenciales y relacionar los cultivos clínicos con los datos epidemiológicos, por lo que podría contribuir a la toma de medidas de control de diseminación de estos microrganismos, en el ámbito hospit