Vacunación y diagnóstico de la leishmaniosis visceral mediante proteínas recombinantes de Leishmania infantum producidas en larvas de insecto
- Autores: Felicitat Todolí Simó
- Directores de la Tesis: Alhelí Rodríguez Cortés (dir. tes.), Jordi Alberola (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2009
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Montserrat Gállego Culleré (presid.), Fernando de Mora Pérez (secret.), Francisco Javier Nieto Martínez (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Resumen
La leishmaniosis visceral es una enfermedad parasitaria grave y a menudo mortal con una incidencia de unos 500 000 casos anuales. En la forma zoonótica (ZVL) causada por L. infantum, el perro es el principal reservorio doméstico del parásito. La identificación de los antígenos involucrados en la respuesta inmunitaria específica es necesaria para desarrollar nuevas estrategias diagnósticas y vacunales.El objetivo de esta tesis ha sido evaluar la utilidad de cuatro antígenos recombinantes de L. infantum rKMPII, rTRYP, rLACK y rpapLe22 en el control de la ZVL mediante su utilización en técnicas de diagnóstico y vacunación. Para ello, empleamos extractos crudos de larvas de Trichoplusia ni infectadas con baculovirus conteniendo las proteínas recombinantes sin purificar. Este sistema permite la obtención de grandes cantidades de proteína con la mayoría de modificaciones postraduccionales de los eucariotas y a bajo coste.El análisis de la respuesta humoral específica mostró que el 75% de los perros enfermos presentaba anticuerpos contra rKMPII, el 50% contra rTRYP y el 42% contra rLACK. Estos resultados demuestran que los tres antígenos, pero especialmente KMPII, son inmunógenos de las células B durante la CanL. La combinación de los ELISA de rKMPII, rTRYP y rLACK en paralelo para el diagnóstico de la CanL tuvo una sensibilidad del 93% y una especificidad del 97% no diferentes de las obtenidas con CTLA, demostrando así que los tres antígenos producidos en T. ni pueden ser utilizados para obtener una técnica sensible, específica, reproducible y de bajo coste para el diagnóstico de la CanL. La evaluación de la respuesta celular in vivo mediante DTH en una población de perros residentes en zona endémica mostró que el 27 % de los perros infectados presentaba una reacción DTH positiva contra rKMPII, el 50 % contra rTRYP, el 18 % contra rLACK y el 18 % contra rpapLe22. Estos resultados demuestran que los cuatro antígenos, pero especialmente TRYP, son capaces de estimular las células T durante la infección por L. infantum. La combinación de los resultados de las pruebas de DTH empleando rTRYP y rKMPII en paralelo consiguió un 78% tanto de sensibilidad como de especificidad, no diferente de la obtenida con LST, sugiriendo que ambos antígenos pueden ser componentes de una técnica de DTH para el diagnóstico de los perros infectados. La estrategia de vacunación DNA-proteína conteniendo los cuatro antígenos en hámsters indujo un aumento significativo en la producción de NO en los macrófagos infectados in vitro, así como una disminución de los niveles de anticuerpos contra el parásito post-infección. Asimismo, indujo una disminución significativa de la carga parasitaria en bazo (86%) y sangre (99%). Esta estrategia también redujo significativamente la aparición de ciertas alteraciones histopatológicas relacionadas con la enfermedad. La vacuna DNA-proteína fue capaz de incrementar la inmunogenicidad de la vacuna de DNA desnudo, que no consiguió inducir la producción de NO ni disminuir la parasitemia. La vacuna basada en proteínas recombinantes no fue protectora. Los resultados demuestran que la estrategia prime-boost con DNA desnudo y las proteínas recombinantes KMPII, TRYP, LACK y papLe22 producidas en T. ni puede ser una estrategia segura, efectiva y de bajo coste contra la ZVL, con una eficacia superior a la obtenida con proteínas recombinantes o con DNA desnudo utilizando los mismos antígenos.
