Resumen de Application of molecular techniques for identification and ennumeration of acetic acid bacteria
Application of molecular techniques for identification and enumeration of acetic acid bacteria:
Los principales objetivos de la tesis son el desarrollo de técnicas de biología molecular rápidas y fiables para caracterizar bacterias acéticas.
Las bacterias acéticas son las principales responsables del picado de los vinos y de la producción de vinagre. Sin embargo, existe un desconocimiento importante sobre su comportamiento y evolución. Las técnicas de enumeración y de identificación basadas en características fisico-químicas existentes son lentas y poco fiables mientras que las técnicas moleculares utilizadas son muy lentas y excesivamente caras y no son aplicables en un trabajo de rutina en el laboratorio ni adecuadas para una gran cantidad de muestras.
En primer lugar se ha conseguido identificar a nivel de especie, mediante dos técnicas de biología molecular como son la PCR-RFLP del rDNA 16S y PCR-RFLP del rDNA 16S-23S ITS. Se lograron identificar todas las especies de bacterias acéticas existentes hasta el momento mediante la combinación de ambas técnicas. Estas técnicas se han utilizado también en estudios ecológicos.
Se han desarrollado dos técnicas para la caracterización a nivel de cepa: ERIC- y REP-PCR. Estas técnicas han permitido la realización de estudios ecológicos en fermentaciones en distintas condiciones, permitiendo profundizar en el conocimiento de su comportamiento y desarrollo en fermentaciones vínicas.
Se han desarrollado dos técnicas para la enumeración, real-time PCR y la detección nested-PCR respectivamente de bacterias acéticas. Estas técnicas presentan la ventaja de no tener que cultivar y por lo tanto de detectar la presencia de bacterias viables pero no cultivables, que han sido descritas dentro de las bacterias acéticas.
Artículos en revistas internacionales:
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Artículos en revistas nacionales:
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Y. Quintero, A González, M Poblet, JM Guillamón, A Mas: Importancia de las bacterias acéticas en el vino. Enorigen, 1, 6-12, 2004 Congresos y capítulos:
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J.M. Guillamón, A. González, M. Poblet, A. Mas: Molecualr techniques of identification and quantification of acetic acid bacteria. Vinegars and Acetic Acid Bacteria International Symposium. Reggio Emilia, 2005.
A. Mas, A. González, J.M. Guillamón, M. Poblet: Acetic acid bacteria population dynamics during wine fermentation. Vinegars and Acetic Acid Bacteria International Symposium. Reggio Emilia, 2005.
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A. González, N. Hierro, M. Poblet, JM. Guillamón, A. Mas. Evolución de la población de las cepas de bacterias acéticas durante la fermentación alcohólica. Palencia, España. Gienol, 2005.
Application of molecular techniques for identification and enumeration of acetic acid bacteria:
The main objectives of the present thesis is the development of fast and reliable molecular techniques for the identification and characterization of acetic acid bacteria.
Acetic acid bacteria are the main responsible of the acetification of the wines and of the Viniegra production. However, there is an important lack of knowledge about their behaviour and evolution through the different processes they are involved. The techniques of enumeration and identification based on their chemo-taxonomic properties are tedious and not reliable meanwhile molecular techniques already used are slow, tedious, very expensive and not useful for routine analysis of big amounts of samples in the laboratory.
We have been able to identify at species level, with two molecular techniques such as PCR-RFLP del rDNA 16S and PCR-RFLP del rDNA 16S-23S ITS. We were able to identify all the described acetic acid bacteria species with the combination of the two techniques. Those, have also been used in ecological studies in wine.
We have developed two techniques for the characterization of aceic acid bacteria at strain level: ERIC- and REP-PCR. Those techniques have allowed us the development of ecological studies in wine fermentations in different condition, allowing us to improve our knowledge about these bacteria behaviour and development through the wine fermentations.
We have developed two techniques for the enumeration, real-time PCR and for the detection, nested-PCR respectively of acetic acid bacteria. Those techniques allow us not to plate the samples before the analysis, therefore they allow the detection of the viable but non-culturable cells, already describes inside the acetic acid bacteria.
