Caracterización de NF-?B en cáncer de mama: posible factor pronóstico y predictivo

• Autores: Jessica Furriol Palmer
• Directores de la Tesis: Ana Lluch Hernández (dir. tes.), Pilar Eroles Asensio (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Federico Rojo (presid.), Consuelo Borrás Blasco (secret.), Gloria Ribas Despuig (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
  • Ciencias médicas
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: RODERIC
• Resumen

  • La activación del factor de transcripción NF-kB juega un papel importante en el proceso de la oncogénesis. El propósito del presente estudio fue determinar si NF-kB se encuentra activado en cáncer de mama e identificar la correlación de su actividad con las características clínico-patológicas del tumor. Además, se analizaron aquellos genes cuya expresión está regulada por NF-kB en tejido tumoral, tejido adyacente al tumor y tejido normal procedente de reducciones mamarias. Finalmente se estudio si NF-kB o alguno de sus genes diana podría tener un papel en el tratamiento del cáncer de mama. Para el estudio de la activación de NF-kB se utilizaron muestras de tejido congelado procedentes de cirugía que fueron incluidas en OCT (compuesto para la temperatura óptima de corte) y a las que se les realizó un análisis histopatológico para comprobar la calidad. De las 450 muestras que analizamos, seleccionamos 148 muestras de carcinoma mamario y 16 de tejido adyacente no tumoral. Se obtuvieron los extractos proteicos de todas ellas y la determinación de la activación de las cinco subunidades de NF-kB se realizó mediante ELISA y se validó mediante western blot. Para la determinación de la expresión génica utilizamos tejido parafinado. Se extrajo el ARN y se realizó la transcripción inversa. La calidad de la muestra se determinó mediante el kit comercial “RT2 RNA QC PCR array”. El perfil génico se realizó con “RT2 Profiler PCR Array Human NF-kB Signaling Targets”. La sensibilidad al tratamiento con el fármaco quimioterápico doxorubicina se realizó con las líneas celulares derivadas de carcinoma mamario MCF7, MDAMB231, MDAMB468, SKBR3 y BT474. La activación de NF-kB inducida por la doxorubicina se evaluó dichas líneas celulares, realizándose también la comparación de la expresión génica antes y después del tratamiento. Se observó que las subunidades de NF-kB p65, p50, p52 y relB se encuentran activadas de forma significativa en tejido tumoral frente a tejido no tumoral, siendo el valor-p ? 0,005 en todos los casos. Además, en carcinoma ductal invasivo la activación de relB estaba asociada al tamaño tumoral (p=0,004), la invasión de tejidos adyacentes (p=0,01) y afectación ganglionar (p= 0,003) mientras que el aumento de la activación de la subunidad p65 estaba asociado a invasión linfática (p=0,033). Asimismo los niveles de activación de p52 y c-rel fueron más altos en carcinoma ductal invasivo que en carcinoma ductal in situ con valores-p de 0,008 y p=0,019 respectivamente. Por otra parte, valores de activación altos para p52 y relB en tumores positivos para receptores de estrógenos estuvieron significativamente asociados a recidiva tras el tratamiento. Respecto al análisis de expresión de genes diana de NF-kB, encontramos diferencias significativas entre la expresión de tejido normal/adyacente y tumoral en los genes CXCL10, CXCL9, MMP9 y LTA cuya expresión fue mayor en tejido tumoral y MYC, EGFR y MAP2k6 cuya expresión disminuía. También observamos que la expresión de MMP9, CXCL9 y MYC en tejido adyacente al tumor estaba aumentada respecto a tejido normal. En líneas celulares observamos que el tratamiento con doxorubicina producía la activación de NF-kB y de la expresión de genes asociados a actividades quimocina y citocina, señalización intercelular y respuesta inflamatoria mientras que la expresión de genes relacionados con actividades anti-apoptóticas y transducción de señales estaba disminuída. Estos datos indican que NF-kB está constitutivamente activado en cáncer de mama y sugiere que la actividad de NF-kB está asociada con la progresión tumoral y la supervivencia libre de enfermedad. Por otro lado, algunos genes asociados a NF-kB con expresión diferente entre tejido tumoral y normal podrían actuar como dianas terapeuticas potenciales en cáncer de mama ya que su expresión se modifica tras el tratamiento con doxorubicina. Finalmente se sugiere que el microambiente tumoral podría tener un papel destacado en la progresión del cáncer y la resistencia a fármacos.