Characterization of cytotoxic ribonucleases: from the internalization pathway to the importance of dimeric structures

• Autores: Montserrat Rodríguez Maynou
• Directores de la Tesis: Maria Vilanova Brugués (dir. tes.), Antoni Benito Mundet (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Girona ( España ) en 2007
• Idioma: inglés
• ISBN: 978-84-690-4263-2
• Depósito Legal: Gi-256-2007
• Tribunal Calificador de la Tesis: M. Victòria Noguès i Bara (presid.), Mercè Figueras i Vall-llosera (secret.), Antonio Planas Sauter (voc.), Bruno Beaumelle (voc.), Francesc Canals Suris (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Quimioterapia
      • Enzimología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: TDX
• Resumen
  • English

    En aquesta tesi sha caracteritzat la ruta dinternalització de lonconasa, una RNasa citotòxica. Els resultats indiquen que lonconasa entra a les cèllules per la via dependent de clatrina i del complex AP-2. Seguidament es dirigeix als endosomes de reciclatge i es a través daquesta ruta que la proteïna exerceix la citotoxicitat. Per altra banda, els resultats daquest treball demostren que PE5, una variant citotòxica de la ribonucleasa pancreàtica humana (HP-RNasa), interacciona amb la importina ? mitjançant diferents residus que tot i que no són seqüencials, es troben propers en lestructura tridimensional daquesta proteïna. PM8 és una HP-RNasa amb estructura cristallogràfica dimèrica constituïda per intercanvi de dominis N-terminals. En aquesta tesi shan establert les condicions per estabilitzar aquest dimer en solució i també es proposa un mecanisme per la dimerització.

  • English

    In this thesis it has been characterized the internalization pathway of onconase, which is a cytotoxic ribonuclease. The results show that onconase enters cells using AP-2/clathrin mediated pathway and then is routed to the recycling endosomes. In addition, the results show that this is the route used by onconase to perform its cytotoxicity. On the other hand, the results indicate that PE5, a cytotoxic human pancreatic ribonuclease (HP-RNase), interacts with importin a using different residues that although they are scattered along the sequence, they are close in the three-dimensional structure of the protein. PM8 constitutes a crystallographic dimer by the exchange of the N-terminal domains. In this thesis it has been investigated the solution conditions that favour the dimeric form and it is proposed a dimerization process of this variant. Finally, the pattern of substrate cleavage is studied by HP-RNase.