Resumen de Efectos de la interacción de compuestos de cobre(II) y rutenio(II) con fibronectina y tubulina: proteínas relacionadas con los procesos químicos del cáncer
Alejandra Rodríguez Morales
Los esfuerzos actuales de investigación en búsqueda de nuevos fármacos antineoplásicos basados en metales están dirigidos a la evaluación de su interacción con la doble hélice del ADN, teniendo en cuenta que este es el mecanismo de acción aceptado para el cisplatino medicamento quimioterapéutico utilizado con éxito para el tratamiento de varios cánceres desde hace unas cuantas décadas. Sin embargo, este enfoque ignora con frecuencia el hecho de que otros componentes celulares pueden ser el blanco de diferente complejos metálicos [1]. En el presente estudio, la fibronectina y la tubulina, proteínas implicadas en procesos celulares fundamentales como la división celular y la migración celular [2], han sido elegidos como dianas de la posible interacción con los compuestos RC8 ([RuIICl(p-cimeno)(1,10-fenantrolina-5,6-diona)][PF6]), CasIII-Ea [Cu(4,7-dimethyl-1,10-fenantrolina)(acetil-acetonato)]NO3), C1(Cu R(sal-L-phen)(phen)), C2(Cu(Sal-Gly)(bipy)) y C3(Cu(Sal-Gly)(phen). La interacción de los compuestos escogidos con las proteínas fibronectina, tubulina y el ADN fueron evaluadas en una primera etapa de la investigación utilizando dicroísmo circular (DC) y microscopía de fuerzas atómicas (AFM). También se han realizado ensayos de MTT para determinar las actividades inhibidoras de crecimiento celular (IC50) de los compuestos en líneas celulares HL60 y HeLa. A continuación se llevaron a cabo pruebas de inmunofluorescencia con los cinco complejos que presentaron los mejores índices de citotoxicidad, en células Hela, utilizando, anti-¿-anti-ß-tubulina y anti-fibronectina anticuerpos para investigar su efecto sobre los microtúbulos y la matriz extracelular. Se utilizaron los agentes comerciales Nocodazole, taxol y Cisplatino, para comparar los mecanismos de acción de los compuestos evaluados. Se ha observado que en los experimentos de AFM y DC se evidencia claramente la interacción de los compuestos con ambas proteínas y el ADN, siendo la casIII-E la que presenta una mayor agresividad. Por otra parte, los ensayos de inmunofluorescencia revelaron un comportamiento despolimerizante de los microtúbulos similar al provocado por el nocodazole en los tratamientos con los compuestos C1, C3 y CasIII-E y la formación de núcleos apoptóticos para todos los compuestos. Por último las imágenes obtenidas con el compuesto RC8 confirman la idea inicial que se tenía de que su acción es a través de la matriz de metaloproteínas. Las pruebas del ciclo celular no mostraron una detención en la fase G2, que habría indicado estabilización de los microtúbulos (que impide la división celular), por el contrario sugerían que las células habían muerto por apoptosis, es decir una muerte limpia, lo cual se confirmó en los ensayos de anexina, aunque en comparación con el cisplatino el porcentaje de células que se encuentran en apoptosis tardía es más alto de lo esperado, lo que quizás se deba a una dinámica de acción más lenta. Como conclusión: la fibronectina y la tubulina son proteínas diana legítimas de potenciales fármacos contra el cáncer basados en metales tales como los compuestos evaluados en la presente Tesis, los cuales mostraron actividad citotóxica apoptótica. Parte de los resultados obtenidos se encuentran en las publicaciones que se citan a continuación: 1. Becco, L; Rodríguez, A; Bravo, M.E; María Prieto, M.J; Ruiz-Azuarac, L; Garata, B; Moreno, V; Gambino, D. New achievements on biological aspects of copper complexes Casiopeínas®: interaction with DNA and proteins and anti-Trypanosoma cruzi activity. J Inorg Biochem. 2012, 109, 49-56. 2. Demoro, B.; de Almeida, R.F.; Marques, F.; Matos, C.P.; Otero, L.; Costa-Pessoa, J.; Santos, I.; Rodríguez, A.; Moreno, V.; Lorenzo, J.; Gambino, D.; Tomaz, A.I. Screening organometallic binuclear thiosemicarbazone ruthenium complexes as potential anti-tumour agents: cytotoxic activity and human serum albumin binding mechanism. Dalton Trans. 2013, 21, 7131-7146. 3. Correia, I,; Roy, R.; Matos, C.P.; Borovic, S.; Butenko, N.; Cavaco, I.; Marques, F.; Lorenzo, J.; Rodríguez, A.; Moreno, V,; Costa Pessoa, J. Vanadium(IV) and copper(II) complexes of salicylaldimines and aromatic heterocycles: Cytotoxicity, DNA binding and DNA cleavage properties. J Inorg Biochem, 2015, 147, 134-146.
