Caracterización molecular y funcional de nuevos transportadores de las familias NRT2 y NAR1 en Chlamydomonas Reinhardtii

• Autores: Vicente Mariscal Romero
• Directores de la Tesis: Aurora Galván Cejudo (dir. tes.), Emilio Fernandez Reyes (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jesús Díez Dapena (presid.), Antony J. Miller (secret.), Conrado Moreno Vivián (voc.), José Ramos Ruiz (voc.), Pedro María Aparicio Tejo (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • La asimilación de nitrato es cuantitativamente la ruta mas importante para la adquisición de nitrógeno en la biosfera. Los sistemas de transporte de nitrato, tanto de membrana plasmática como de cloroplasto, juegan un papel importante de regulación de la ruta ya que permite ajustar la cantidad de nitrato que se transporta con la capacidad de reducirlo y asimilarlo.

    En este trabajo se han caracterizado a nivel molecular y funcional los transportadores de nitrato/nitrito correspondientes a las familias Nrt2 y Nar1 de Chlamydomonas. Los resultadosobtenidos en esta tesis son:

    1. Las familias Nar1 y Nrt2 de Chlamydomonas estan formadas por 6 miembros (Nar1) y 5-6 miembros (Nrt2). Se ha determinado el patrón de regulación por carbono y nitrógeno de cada uno de los genes y se han realizado estudios de expresión heteróloga en oocitosde Xenopusde 4 de ellos con el fin de conocer su especificidad por el substrato.

    2. Se han identificado tres nuevas actividades para la entrada de nitrato al interior celular en chlamydomonas. Dos de ellas (SVd y SVI) son constitutivas y de baja afinidad para nitrato, pero reguladas por luz. La tercera (SVI) es biespecífica y de alta afinidad para nitrato y nitrito, y se induce tras largo tiempo de exposición a luz/bajo CO2. Se han identificado tres actividades de transporte de nitrito al cloroplasto. La actividad pNiT1 es debida a Nar1.1, se induce en alto CO2, y se inhibe por amonio. La actividad pNiT2 es debida a Nar1.2, se induce en bajo CO2, y no se afecta por cloruro ni amonio. La actividad pNiT3 es debida a Nar1.3, se activa por cloruro y no se inhibe por amonio.

    3. Se hanestudiadotres mutantesen sistemas de transprote:

    a)La mutación23c afecta a los sistemas 111y IV pero no afecta al sistema VI.

    b)La estirpe de Chlamydomonas6145c porta una mutación en el gen Nrt2.3, que parece ser críptica.

    c)Se ha determinado que la ausencia Nar1.1 da lugar a una ineficiencia en la asimilación de