Plataformas analiticas en metabolómicas y su aplicación para el estudio de la resistencia-sensibilidad a herbicidas
- Autores: Antonia María Rojano Delgado
- Directores de la Tesis: María Dolores Luque de Castro (dir. tes.), Rafael de Prado Amián (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2012
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Luis González Fernández (presid.), María Dolores Osuna Ruiz (secret.), José Luis Martínez Cordón (voc.)
- Calificación: Apto Cum Laude
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: Helvia
- Resumen
Los estudios de los fenómenos de resistencia¿susceptibilidad de las hierbas a los herbicidas requieren la puesta a punto de métodos adecuados para la determinación de estos compuestos, pero también de los metabolitos a los que dan lugar las diferentes rutas en los que están implicados estos fenómenos. Para aportar nuevos métodos que permitan esos estudios se ha desarrollado la siguiente investigación: 1. Se ha puesto a punto un método para la determinación de glifosato y sus metabolitos basado en electroforesis capilar con la sensibilidad y selectividad adecuadas para la determinación de todos ellos en plantas.
2. Los resultados obtenidos en los estudios realizados con el anterior método mostraron un metabolito como marcador de la diferencia entre plantas susceptibles y resistentes a glifosato, lo que condujo al desarrollo de un método fotométrico simple para la cuantificación de este único compuesto: el glioxilato. El método ha permitido discernir plantas resistentes de sensibles a tiempos cortos de aplicación, lo que supone un gran avance en la lucha contra la resistencia a glifosato.
3. Se han desarrollado métodos para la determinación de imazamox y sus metabolitos y para glufosinato y sus metabolitos a pesar de no existir patrones de los productos del metabolismo de ninguno de los herbicidas. Para ello se han usado extractos de plantas tratadas y no tratadas con el herbicida en cuestión y se han cromatografiado mediante LC utilizando como detector un DAD; se ha optimizado la separación de los picos que aparecen en presencia del herbicida y se han identificado los compuestos que los producen mediante un detector de masas de tiempo de vuelo. Una vez conocidos los tiempos de retención cromatográficos de cada uno de los compuestos, se puede utilizar el LC¿DAD para una cuantificación relativa al herbicida o a otro compuesto-patrón con estructura semejante al metabolito en cuestión. La aplicación de los métodos a biotipos diferentes de trigo resistente¿susceptible (caso del imazamox) y a plantas genéticamente modificadas y no modificadas también de trigo (caso del glufosinato) han permitido la cuantificación relativa de cada metabolito en cada estudio.
4. En todos los casos la preparación de la muestra se auxilió con ultrasonidos para acelerar la lixiviación de los compuestos de interés de las plantas en estudio, lo que redujo considerablemente el tiempo total del análisis.
Es ésta la primera vez que: (i) Se propone un método para la determinación cuantitativa de glifosato y todos sus metabolitos en plantas; (ii) se ha desarrollado un método simple, utilizable en campo, para la respuesta rápida a la acción de glifosato a través de uno de sus metabolitos; (iii) se han desarrollado métodos cromatográficos simples para la determinación de imazamox y todos sus metabolitos, y para glufosinato y todos sus metabolitos, que permiten su cuantificación relativa sencilla a pesar de no existir patrones de estos metabolitos; (iv) se han aplicado los métodos para conocer de forma inequívoca las vías de transformación de los dos herbicidas en plantas resistentes¿sensibles y en plantas genéticamente modificadas y no modificadas.
