Resumen de Detección y caracterización de Cryptosporidium spp. mediante métodos tradicionales y PCR en diferentes matrices (heces y aguas)
Fernando Guillermo Fredes Martínez
Cryptosporidium spp. es un importante parásito protozoario, mundialmente distribuido, que causa enfermedad digestiva en diferentes especies animales, especialmente a terneros menores de 30 días de edad, incluido el humano. Los ooquistes excretados por las heces, que son inmediatamente infectantes y resistentes, contaminan aguas y suelos, constituyendo una amenaza para la salud pública. Debido al escaso número de ooquistes presentes en el ambiente y su reducida dosis infectante se hacen necesarios métodos rápidos y sensibles para su detección en muestras animales y ambientales. Por lo anterior el objetivo de este estudio fue contribuir al conocimiento del diagnóstico de laboratorio tanto microscópico como molecular de Cryptosporidium spp. en muestras de heces diarreicas de terneros y de agua inoculada con el agente, mediante la implementación y estandarización de protocolos microscópicos tradicionales y un ensayo de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) género-específico. Para lo anterior, se utilizaron y analizaron 205 muestras fecales diarreicas de terneros, comparando la eficiencia de dos métodos de tinción microscópicas para el diagnóstico del parásito, el de Auremina (AU) y el de Ziehl-Neelsen modificado (ZN). Por primera vez en Chile se usó una prueba inmunocromatografica (CR) y una molecular (PCR) para confirmar la observación microscópica de los ooquistes de Cryptosporidium spp. en la muestras fecales de bovinos estudiadas. De las 205 muestras fecales, se detectaron 115 muestras positivas con AU (56,1%) y 102 con ZN (49,8%), resultado que mostró diferencias significativas (p ≤0,05), al ser AU más sensible. Por otro lado, la concordancia entre los ambos métodos fue casi perfecta (valor kappa de 0,83). El método CR y la realización de una PCR especie específica, también permitieron determinar la identidad de la especie del parásito detectado, como Cryptosporidium parvum. Esta última prueba, realizado en unas pocas muestras tomadas al azar. Así también, de las 102/205 muestras positivas a ZN, se seleccionaron al azar 58 para confirmar los diagnósticos mediante CR y todas resultaron también positivas. Diez muestras fecales ZN negativas, también fueron confirmadas como negativas mediante CR. La PCR género específica desarrollada, confirmó 37 de la 58 ZN positivas (64%) y dio negativa al 100% de las diez muestras CR negativas. La técnica molecular desarrollada fue capaz de...
