Comparación de las células deciduales estromales humanas y sus precursoras las células endometriales: fenotipo antigénico, diferenciación, apoptosis y relación funcional con linfocitos
- Autores: Ester Leno Durán
- Directores de la Tesis: María del Carmen Ruiz Ruiz (dir. tes.), Enrique García Olivares (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Granada ( España ) en 2011
- Idioma: español
- ISBN: 9788469466810
- Tribunal Calificador de la Tesis: Ana Clara Abadía Molina (presid.), Raquel Muñoz Fernández (secret.), Raúl Ortiz Quesada (voc.), Maria Luisa Vargas Pérez (voc.), Irene Tirado (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: DIGIBUG
- Resumen
El endometrio humano se caracteriza por su regeneración cíclica e intensa durante el periodo reproductivo femenino, que es regulado por las variaciones en los niveles hormonales durante el ciclo menstrual. Estos cambios conllevan a la proliferación y diferenciación de las células endometriales. En el embarazo, la adhesión del blastocisto al endometrio lleva consigo la diferenciación de células endometriales estromales (ESC) a células funcionalmente distintas, llamadas células deciduales estromales (DSC), las cuales son el principal componente de la decidua, el tejido materno en íntimo contacto con el trofoblasto fetal. Las DSC son esenciales para la implantación. Durante el embarazo, las DSC se diferencian (decidualizan) por la progesterona y otras hormonas que producen un aumento en los niveles intracelulares de cAMP.
En el embarazo, las DSC van muriendo por apoptosis, al mismo tiempo que se desarrollan otras estructuras de la placenta. La diferenciación y apoptosis de las DSC durante la decidualización en la decidua es crucial para que se produzca una invasión controlada del trofoblasto. Además, la apoptosis de las células deciduales permite el crecimiento del embrión. A pesar de la importancia de la apoptosis en la decidua, no se conocen con exactitud los mecanismos por los cuales se produce la muerte celular.
En nuestro trabajo de tesis hemos comparado las células ESC y DSC: dos tipos celulares de células estromales uterinas que, como hemos mencionado, difieren en su estado funcional. Las líneas celulares DSC y ESC, mantenidas en cultivo presentaron el mismo fenotipo antigénico, expresando CD10, CD29, CD73, CD54 y BAFF.
Además, tanto DSC como ESC protegieron de la apoptosis espontánea a los linfocitos. El porcentaje de linfocitos apoptóticos se determinó por citometría de flujo y detectamos que las DSC protegen de la apoptosis a linfocitos NK deciduales, y a linfocitos T y NK periféricos, los cuales presentan diferencias fenotípicas con respecto a los linfocitos NK deciduales. Nuestros resultados sugieren que las DSC pueden jugar un papel importante en el mantenimiento de la supervivencia de los linfocitos en la interfase materno-fetal. Las ESC presentaron un efecto similar en la protección de la apoptosis espontánea de linfocitos T procedentes de sangre menstrual. El efecto protector de las DSC sobre los linfocitos está mediado por factores solubles secretados por dichas DSC, ya que la protección observada al cultivar los linfocitos con sobrenadantes de cultivo de DSC fue similar a la detectada en el co-cultivo con estas células.
También estudiamos por citometría de flujo el efecto de la decidualización sobre el fenotipo antigénico y funciones de DSC y ESC. La decidualización se confirmó mediante la detección de prolactina en el medio de cultivo. Tanto DSC como ESC decidualizadas con progesterona y cAMP produjeron prolactina, aunque las DSC secretaron cantidades mayores que las ESC. Del mismo modo, las DSC decidualizadas produjeron más IL-15 que las ESC decidualizadas. En la diferenciación de DSC también se detectó un cambio en la expresión de marcadores fenotípicos, ya que disminuyó la expresión de CD54, CD29 y BAFF, aunque no cambió la expresión de otros marcadores estudiados como CD73, CD10, CD106 y CD14. Sin embargo, al decidualizar las ESC solo se observaron cambios en la expresión de CD29.
La decidualización de DSC y ESC indujo apoptosis en las propias DSC y ESC, aunque la muerte celular fue mayor en las DSC. Paradójicamente, las DSC fueron resistentes a diferentes inductores de apoptosis.
Mediante western-blot, se analizaron los niveles de factores pro- y anti-apoptóticos durante la decidualización. En las células DSC decidualizadas se observó una disminución de las proteínas pro-apoptóticas BclxL, cFLIP y XIAP, así como en las proteínas pro-apoptóticas Bax, Bid y Apaf-1. Además encontramos un aumento de Bim, una proteína pro-apoptótica. Estos resultados fueron confirmados por PCR-array.
Por otro lado, analizamos el efecto que tenían los sobrenadantes procedentes de DSC decidualizadas sobre células DSC indiferenciadas, y sobre otros tipos celulares relacionados como ESC y FDC, encontrando que dichos sobrenadantes inducían apoptosis en todas ellas, sorprendentemente, los mismos sobrenadantes que protegieron de la apoptosis espontánea a los linfocitos deciduales.
En resumen, nuestros resultados demostraron que DSC y ESC tienen un fenotipo antigénico similar y capacidad para proteger a los linfocitos de la apoptosis espontánea. Además, encontramos que el tratamiento con progesterona y cAMP induce decidualización, junto con apoptosis, en DSC y ESC. Sin embargo, las ESC parecen menos sensibles a la decidualización que las DSC, como demostró la menor secreción de prolactina y de IL-15, al igual que la menor inducción de apoptosis observada en ESC; además, se encontraron menos cambios en el fenotipo antigénico de las ESC al decidualizar. Finalmente, demostramos que la decidualización en DSC produce un desequilibrio en los niveles de proteínas pro- y anti-apoptóticas.
Nuestros resultados sugieren que DSC y ESC liberan al sobrenadante factores solubles que son responsables del efecto protector de la supervivencia de linfocitos y que la decidualización promueve la producción de factores solubles con capacidad de inducir apoptosis en DSC.
