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Resumen de Expresión antigénica por inmunohistoquímica e inmunocitoquímica y western blot de proteínas del citoesqueleto y de la mielina en células de müller de la retina de los vertebrados

Adela Prada Quesada

  • Los estudios al microscopio electrónico en la retina de las aves han mostrado que las prolongaciones de las células de Müller, envuelven a los axones de las células ganglionares. Sin embargo, los mecanismos de cómo estas células contribuyen a la mielinización no se conocen. Tampoco se sabe si las células de Müller de retinas mielinizadas en otros vertebrados participan en dicho proceso. El objetivo principal de esta tesis doctoral ha sido encontrar los datos moleculares que demuestren la participación de las células de Müller en el proceso de mielinización de los axones de las células ganglionares de la retina de las aves.

    Buscamos moléculas expresadas específicamente en la mielina y por los oligodendrocitos del SNC, que no hubieran sido previamente estudiadas en la retina del pollo. Elegimos MOSP, una molécula de la superficie de la membrana que se expresa específicamente en la mielina y por los oligodendrocitos del SNC de vertebrados (Dyer y cols., 1991).

    Hemos estudiado la expresión de MOSP en secciones de retina del pollo inmunorreaccionadas con el anticuerpo monoclonal anti-MOSP, encontrando su expresión en las células de Müller, en las células peripapilares y en las terminaciones del axón de las células horizontales. La demostración de estos hechos ha sido posible gracias a la utilización en paralelo de marcajes individuales y dobles marcajes con anticuerpos que reconocen proteínas del citoesqueleto de las células de Müller como la Vimentina y 3CB2 (Prada y cols., 1995), y anticuerpos que reconocen moléculas funcionales como la Glutamina Sintetasa (GS), la cual sólo está presente en astrocitos del SNC y en las células de Müller de la retina (Prada y cols., 1998). Otras moléculas relacionadas con la mielina como MAG, Gal C, O4, y A2B5, también fueron testadas; encontrando que su localización está restringida a la capa de fibras del nervio óptico, excepto para O4.

    La expresión de MOSP en células gliales peripapilares nos llevó a realizar una caracterización molecular de estas células (Quesada y cols., 2004). Para demostrar que ninguna otra célula de la retina del pollo expresa MOSP, hicimos preparaciones de células disociadas con la enzima SF-proteasa, esta técnica disocia las células preservando sus formas naturales (López y cols., 1997) Las células disociadas fueron inmunorreaccionadas con anti-MOSP y con anti-GS. MOSP se expreso exclusivamente en las células de Müller y en los terminales de los axones de las células horizontales.

    Los inmunoblots de extractos proteicos de retinas nos han permitido determinar el peso molecular de MOSP.

    Para demostrar que la expresión de MOSP en las células de Müller está relacionada con el proceso de mielinización, partimos de la hipótesis de que la célula de Müller de todas las retinas mielinizadas deberían expresar MOSP, mientras que las células de las retinas no mielinizadas no lo expresarían. Para ello estudiamos inmunohistoquímica e inmunocitoquímicamente y con inmunoblot, la expresión de MOSP en las retinas de la tortuga y del lagarto que son mielinizadas, en la retina del conejo que es parcialmente mielinizadas, y en las retinas de la rata y del ser humano que son amielínicas (la retina humana puede sin embargo ser mielinizada). Nuestra hipótesis fue confirmada. Además pudimos observar que las retinas del lagarto y del conejo expresan MOSP solamente en las células de Müller.

    Finalmente, estudiamos la expresión de MOSP en la retina embrionaria del pollo, para establecer una posible relación espacial-temporal entre el inicio de la expresión de MOSP y el comienzo de la mielinización. Encontramos que MOSP comienza a expresarse específicamente en la célula de Müller en un área dorsocentrotemporal (DCT) cerca de la cabeza del nervio óptico en E13, un día antes de que la mielinización empiece a ser observada por microscopia electrónica en la retina central (Nakazawa y cols., 1993). Nuestros resultados evidencian que las células de Müller de las retinas mielinizadas son formadoras de mielina, y contribuye con MOSP a la mielinización de dicho tejido.


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