Clonación de una sonda de ADN para la detección no isotópica de genes de resistencia a antibióticos beta-lactámicos en aislados clínicos
- Autores: María Cristina Gutiérrez Pérez
- Directores de la Tesis: Carlos García Riestra (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidade de Santiago de Compostela ( España ) en 1990
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Benito Regueiro Varela (presid.), Fernando Domínguez Puente (secret.), José María Fraga Bermúdez (voc.), Rafael Gómez-Lus Lafita (voc.), Antonio Rodríguez Torres (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Los métodos tradicionales para detectar resistencias bacterianas a los antibióticos son demasiado lentos como para tenerlos en cuenta en las decisiones terapéuticas iniciales. Aplicando técnicas de recombinación genética e hibridaciones moleculares se pueden acelerar. Por ello se ha obtenido una sonda de ADN específica para los genes que codifican betalactamas, principal mecanismo de las bacterias patógenas para ser resistentes a los beta-lactámicos. El trabajo se inicio seleccionando un grupo de E.coli productores de beta-lactamasas plasmídicas de amplio espectro (determinando su mínima concentración inhibitoria - CMI -, su producción de beta-lactamasas, extrayendo sus plásmidos y transformándolos en una bacteria receptora). A continuación se caracterizaron los plásmidos de resistencia (estudiando su fenotipo (por su CMI y por el tipo de beta-lactamasa producida). Y su genotipo (determinando el peso molecular de cada plásmido y su mapa de restricción). Por ultimo, se clono en el vector pRK el gen de resistencia y se subclono en el vector pACXC184 hasta tener un inserto de 1.6 Kb, que se uso como sonda de ADN. Esta sonda se marco con fotobiotina y demostró ser especifica para las beta-lactamasas tipo TEM. Se hibridó con aislados clínicos por southern-blot, dot-blot e hibridación de colonias y el sistema de detección fue tan sensible como los radioisotópicos.
