Resumen de Caracterización bioquímica y funcional del factor de transcripción y splicing PRPF40B
La variabilidad y complejidad característica de los organismos eucariotas viene dada por la expresión génica, un proceso que conlleva una serie de etapas altamente reguladas y conectadas entre sí, que van desde la transcripción del ADN para generar un ARNm que será traducido a proteínas. El procesamiento del ARNm mediante el splicing durante su maduración, supone una etapa adicional de variabilidad, al generar diferentes isoformas de transcrito a partir de un mismo gen. Este proceso es altamente regulado y la aparición de fallos ha sido asociada a enfermedades neurodegenerativas y cáncer. La comunicación entre el splicing y su etapa anterior, la transcripción, aumentan el control de la regulación y mejoran la eficiencia, por ello la relación entre ambos procesos ha sido ampliamente estudiada. Diversos factores han sido propuestos como posibles acopladores entre la transcripción y el splicing al estar involucrados en su conexión física y funcional. Entre ellos destacan un grupo de proteínas que comparten unos motivos estructurales, los dominios WW y FF, capaces de establecer importantes interacciones para conectar las maquinarias de estos dos procesos.
Esta tesis aporta conocimientos básicos sobre la proteína con dominios WW y FF menos conocida hasta la fecha, PRPF40B, un homólogo humano del factor esencial de splicing en levaduras Prp40. Nuestros experimentos muestran la localización nucleoplasmática de PRPF40B y su enriquecimiento en los speckles nucleares, así como los dominios estructurales más relevantes responsables de su distribución. También hemos identificados importantes interacciones con factores de splicing que relacionan a PRPF40B con etapas iniciales de este proceso. Partiendo de estos datos, hemos realizado ensayos funcionales de splicing que muestran que PRPF40B es capaz de regular el splicing alternativo de genes apoptóticos como Fas y algunas secuencias necesarias para desempeñar dicho papel. Basándonos en los resultados de Fas, hemos observado que el silenciamiento de PRPF40B incrementa el número de receptores de membrana Fas/CD95 y aumenta la muerte celular por apoptosis.
Mediante un análisis global del transcriptoma humano en células de neuroblastoma SH-SY5Y bajo condiciones de silenciamiento de PRPF40B hemos revelado que este factor está involucrado en rutas de cáncer, señalización y transporte del sistema nervioso. Partiendo del array y realizando ensayos funcionales, mostramos que PRPF40B es capaz de activar la transcripción. Además hemos confirmado que mutaciones asociadas al síndrome mielodisplásico disminuyen drásticamente la capacidad de activación transcripcional de PRPF40B.
