Expresión y caracterización bioquímica de proteínas sulfoférricas implicadas en la reducción del nitrato en bacterias del género rhodobacter

• Autores: María Francisca Olmo Mira
• Directores de la Tesis: Conrado Moreno Vivián (dir. tes.), María Dolores Roldán Ruiz (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Roldán Nogueras (presid.), Emilio Fernandez Reyes (secret.), Enrique Aguilar Benítez de Lugo (voc.), Enrique Flores García (voc.), David J. Richardson (voc.)
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • La reducción del nitrato tiene un papel importante en el ciclo biogeoquímico del nitrógeno e implicaciones en la agricultura, medio ambiente y salud pública. El nitrato actúa como un aceptor alternativo de electrones durante la respiración anaeróbica bacteriana y es la mayor fuente de nitrógeno para plantas y bacterias. En procariotas, la reducción de nitrato a nitrito se lleva a cabo por tres diferentes tipos de enzimas, Nas, Nar y Nap, con propiedades reguladoras y bioquímicas distintas. Además, tipos diferentes de nitrito reductasas están presentes en bacterias. Sin embargo, tanto las reducciones de nitrato como las de nitrito requieren la presencia de centros sulfoférricos, no sólo en las enzimas nitrato y nitrito reductasas, sino también en otros componentes del sistema de reducción de nitrato.

    En esta tesis doctoral se llevó a cabo el estudio de algunas proteínas sulfoférricas implicadas en la reducción del nitrato en bacterias fototróficas.

    Este estudio se desarrolló en dos estirpes del género Rhodobacter: R.

    sphaeroides DSM158, que contiene una sistema periplásmico (Nap) de reducción del nitrato, y R. capsulatus E1F1, que tiene un sistema asimilador (Nas). Las proteínas sulfoférricas estudiadas fueron NapF de R. sphaeroides DSM158 y Hcp, NasB y NirD de R. capsulatus E1F1.

    Resultados 1.- NapF es la única proteína sulfoférrica, además de la subunidad catalítica NapA, en el sistema de reducción periplásmica del nitrato en R. sphaeroides DSM158 y otras bacterias. La secuencia del gen napF sugiere la presencia de cuatro centros del tipo [4Fe-4S] que son unidos transitoriamente a la proteína, como también se dedujo de los estudios espectroscópicos de la proteína recombinante 6XHis-NapF purificada de E.

    coli. Además, una proteína nitrato reductasa inactivada mediante su incubación con bipiridilo fue reactivada por NapF sólo si también estaba presente la proteína cisteína desulfurasa NifS