Regulación negativa de la asimilación de nitrato en chlamydomonas reinhardtii

• Autores: Amaury Tassin de Montaigu
• Directores de la Tesis: Emilio Fernandez Reyes (dir. tes.), Aurora Galván Cejudo (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2006
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jesús Díez Dapena (presid.), Maria M. Malagón (secret.), Antonio Di Pietro (voc.), Francisco Miguel Cánovas Ramos (voc.), Antonio José Márquez Cabeza (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • En Chlamydomonas reinhardtii la fuente de N preferida es el amonio, y la presencia simultánea de amonio y nitrato en los medios de cultivo da lugar a una inhibición de la ruta de asimilación de nitrato a distintos niveles. Se ha descrito la inhibición transcripcional y post-transcripcional por amonio de los transportadores de nitrato y de la nitrato reductasas del alga pero los actores moleculares que intervienen en esta vía de señalización siguen desconocidos.

    Con el fin de identificar genes implicados en este proceso, se ha generado una colección de mutantes insercionales de Chlamydomonas y aislado 40 mutantes amonio-insensibles (AI), que no respondían a la señal negativa del amonio. Para ello se utilizó una estirpe parental que contenía el gen reportero de la arilsulfatasa (Ars) (1) bajo control del promotor del gen Nia1. Los mutantes Al expresaban actividad Ars en presencia de amonio (2).

    Estos mutantes etiquetados tenían una sola copia del DNA marcador, y se identificaron las regiones genómicas donde habían tenido lugar las inserciones en la mayor parte de ellos mediante RESDA-PCR(3).

    Se eligieron varios mutantes para estudios más profundos. Se determinó a gran escala la expresión de los genes afectados mediante PCR a tiempo real en 17 mutantes Als inducidos en medios con distintas fuentes de nitrógeno, usando la tecnología de placas de 384 pocillos asistido por robot. El objetivo de estudiar el efecto de unas mutaciones Als sobre genes identificados, y afectados en la colección de mutantes y así dibujar un primer esquema de esta vía de señalización. Se concluyó que un gen para una posible guanilato ciclasa aprecía tener un papel central en la señalización negativa, implicando la participación del GMPc en esta ruta.