Patogenia de las encefalopatías espongiformes transmisibles de distribución de la PRPres y cambios en las poblaciones celulares inmunocompetentes del intestino en modelos murinos
- Autores: José Lorenzo Romero Trevejo
- Directores de la Tesis: José Carlos Gómez Villamandos (dir. tes.), Pedro Sánchez Cordón (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2008
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Amador Jover Moyano (presid.), María Luisa Arias Neira (secret.), José Manuel Sánchez-Vizcaíno Rodríguez (voc.), Enrico Bollo (voc.), Alfonso Blanco Rodríguez (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia y distribución secuencial de la PrPd tras una inoculación oral en un modelo murino experimental, a fin de estudiar las lesiones histopatológicas y ultraestructurales, los cambios numéricos y la expresión de citoquinas en los macrófagos y otras células inmunes del intestino de ratones inoculados con Scrapie así como el posible papel que dichas poblaciones celulares desempeñan en la patogenia de la enfermedad. Para ellom, se inocularon 108 ratones C57BL/6J con la cepa RML de Scrapie murino y se alojaron en grupos de seis. Igualmente, se inocularon 30 ratones con un macerado de cerebro normal, mientras que otros 30 animales se mantuvieron sin inocular.
Los animales se sacrificaron secuencialmente entre los 0 y 400 dpi, tomándose muestras de intestino, NLM y encéfalo y fijándolas en una solución de formol, sales de zinc y glutaraldehido. Las muestras se procesaron de forma rutinaria para realizar los estudios morfológico, inmunohistoquímico y ultraestructural. El estudio histopatológico se realizó sobre cortes de 5 fÊm provenientes de las muestras fijadas en formol y tenidos con hematoxilina-eosina. Para el estudio inmunohistoquímico se empleó la técnica de la avidina-biotina-peroxidasa. La PrPd se evidenció sobre cortes de 3 fÊm provenientes de las muestras fijadas en formol con el anticuerpo policlonal Rb482. La identificación de las poblaciones macrofágicas (Mac-3) y de las células productoras de citoquinas (TNF-f¿, IL-1f¿, IL-6, IL-10 and IFN-fÄ) se llevó a cabo sobre cortes de 3 fÊm provenientes de las muestras fijadas en sales de zinc.
Los resultados de nuestro estudio muestran que la distribución secuencial de la PrPd en MCT y CDF dfe las PP y NLM (60 dpi), 'plexos periféricos del intestino (120 dpi) y cerebro (180 dpi) apoyan la hipótesis de la vía neural para la diseminación del rion desde la luz intestinal hasta el SNC después de una infección oral. Además el incremento en el numero de macrofagos intraepiteliales a los 15 dpi y en lamina propia y submucosa entre los 15 y 75 dpi indica un papel importante de esta poblacion en la absorcion y transporte de la PrPd desde la luz hasta los foliculos linfoides de las PP. Ademas, la presencia de depositos electrodensos de proteina fibrilar en macrofagos intraepiteliales y enterocitos indican la implicacion de estos dos tipos celulares en la absorcion del agente. El incremento en el numero de celulas reactivas frente al TNF-f¿ en el epitelio a los 15 dpi apoya la existencia de una respuesta inmune frente al prion en las fases tempranas de la enfermedad. Sin embargo, la disminucion en la expresion de este mediador quimico en lamina propia y submucosa a partir de esa fecha, indica una inhibicion de esta respuesta inmune. La inhibicion no esta causada por una sobreexpresion de IL-10 por parte de los linfocitos T, constituyendo un mecanismo provocado por el prion para su propagacion y establecimiento en las celulas diana de los foliculos linfoides de las PP y NLM. Por ultimo, los maximos niveles de PrPd observados en las PP a los 180 dpi, junto con la disminucion en el numero de macrofagos en esta localizacion y en esta fecha y la ausencia de expresion de citoquinas indican un fracaso en el intento de controlar la progresion de la enfermedad. Esta ausencia de respuesta inmune favorece que el prion alcance los plexos mientericos del intestino antes de acumularse en el SNC.
