Aislamiento de expressed sequence tags (ests) de fresa durante el proceso de interacción de la planta con el patógeno colletotrichum acutatum. Caracterización molecular del gen fawrky de fresa (fragaria x ananassa)

• Autores: Sonia Encinas Villarejo
• Directores de la Tesis: José L. Caballero Repullo (dir. tes.), Juan Blanco Muñoz (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2007
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: M. Isabel G. Roncero (presid.), Fernando Romero Muñoz (secret.), Ana M. Maldonado Alconada (voc.), Blanca San Segundo de los Mozos (voc.), Victoriano Valpuesta (voc.)
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• Resumen

  • En esta Tesis Doctoral, se han aislado e identificado genes de fresa (F.ananassa) con expresión alterada tras la infección de la planta con el patógeno fúngico Colletotrichum acutatum, causante de la antracnosis en este cultivo. Además, se ha caracterizado molecularmente uno de estos genes, gen Fawrky, así como el gen AtWRKY75 de A.thaliana, ortólogo del gen de fresa.

    Mediante metodología SSH, se han construido 6 genotecas sustractivas de F.ananassa de 3 cultivares diferentes con diferente grado de susceptibilidad a C.acutatum: cv Andana y cv.Cart-2 (moderadamente susceptibles), y cv. Camarosa (muy susceptible).

    A partir de estas genotecas se han aislado y purificado más de 15000 ESTs o fragmentos de ADNc que se expresan diferencialmente en respuesta a la infección por C.acutatum o al tratamiento con elicitores de estrés abiótico.

    A partir de una de las genotecas sustractivas se ha seleccionado una EST cuya secuencia presentó altos valores de identidad y similitud con genes que codifican factores de transcripción tipo WRKY de plantas superiores.

    Los resultados indican que el gen Fawrky responde a la infección aumentando su expresión, pero que la intensidad y el perfil de expresión del gen son dependientes de tejido y cultivar. Los resultados demuestran, así mismo, que el gen Fawrky responde activándose a elicitores de respuesta a de defensa de las plantas. Se ha explorado la participación del gen Fawrky2 en mecanismos defensa de la planta a patógenos a través de la inhibición de su función en fresa mediante ARNi, sobreexpresión heteróloga en A.thaliana Wt y complementación de mutantes en el gen ortólogo AtWRKY75 de A.thaliana y posterior estudio del comportamiento de las plantas transgénicas frente a la infección con sus correspondientes organismos patógenos (C.acutatum, en fresa; Pseudomonas syringae, en A.thaliana).