Desoxirribonucleasas de Streptomyces: Purificacion y caracterizacion de un enzima con un nuevo tipo de especificidad en Streptomyces Glaucescens

• Autores: Jesús Manuel Aparicio Fernández
• Directores de la Tesis: María Jesús Martín Sánchez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Oviedo ( España ) en 1991
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Carlos Hardisson Rumeu (presid.), Carlos López Otín (secret.), Paloma Liras Fernández (voc.), Fernando Leal Sánchez (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
      • Fisiología bacteriana
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• Resumen

  • Streptamyces glaucescens y otras especies de streptamyces presentan una dnasa periplasmica cuya sintesis esta sujeta a contro nutricional hemos purificado la actividad de s.Glaucescens a homogeneidad aparente por cromatografia de fosfocelulosa, seguida de las siguientes cromatograficas: Heparina-agarosa, cibarcon blue f3-ga sefarosa, sefadex g-75 y mono q fplc. El enzima presento un peso molecular aparente de 39600, un pi de 8.15 aproximadamente, un ph optimo de 7.5 y un requerimiento absoluto pro cationes divalentes en la reaccion. Es inhibido por altas concentraciones de sal, hg2+ o iodoacetato, agentes quelantes o residuos fosforicos, y estimulado por dimetilsufoxido. La nucleasa muestra mayor afinidad por adn de doble hebra que por adn de cadena simple, y no hidroliza arn. Produce asimismo "nicks" en adn de doble hebra, y degreada and circular, generando extremos terminales 3'-oh y 5'-p. Mediante experimentos de anlisis cromatografico de los extremos de los fragmentos generados y "footprinting" se ha determinado que el enzima reconoce y corta preferentemente en la secuencia dgdg, siendo la primera nucleasa descrita con esta especificidad.