Localización, clonación y organización de los genes de la nodulación en Rhizobium trifolli

• Autores: Francisco Rodríguez de Quiñones y Torres
• Directores de la Tesis: Manuel Megías Guijo (dir. tes.), Francisco Ruiz Berraquero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 1986
• Idioma: español
• Número de páginas: 138
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  • Tesis en acceso abierto en: Idus
• Resumen

  • 1. Rhizobium trifolii RS1051 alberga tres megaplásmidos, de pesos moleculares aproximados de 190, 280 y 470 Mdal. El menor de ellos, pRtrRS1051a, es autotransmisible y el plásmido simbiótico, pSym, de esta cepa, pudiendo ser expresado en cepas curadas de Agrobacterium tumefaciens, a las que capacita para nodulación ineficiente de trébol.

    2. Se han obtenido derivados deleccionados y curados del plásmido simbiótico de RS1051, que son indispensables para cualquier estudio genético. Así mismo, se han subclonado regiones intragénicas de los genes nodC y hsnD de R. meliloti 41, que son particularmente útiles como sondas radiactivas. Igualmente, se ha construido un banco de genes de R. trifolii RS1051 que se ha demostrado posee unas elevadas calidad y representatividad, y que es un material biológico de inapreciable utilidad y versatilidad.

    3. En dos capas distintas de R. trifolii se ha encontrado un comportamiento muy similar frente a sondas radiactivas conteniendo genes nif y nod de R. meliloti 41, lo que revela una organización similar en los genes simbióticos: nodD se presenta en dos copias, de las cuales probablemente sólo una es funcional, y la otra está situada en RS1051 en un replicón que no es el plásmido simbiótico; hsnD está ausente, y nodC, nodD y hsnB, esto es las regiones de especificidad de hospedador y nod �común, se hallan íntimamente agrupadas en el plásmido simbiótico.

    4. Del banco de genes de RS1051 se han aislado dos cósmidos, denominados pFR14 y pFR15, que comparten una región de DNA de 14 Kb en la que se encuentran todos los genes suficientes para nodular trébol, y que son capaces de ampliar el rango de hospedador de R. meliloti.

    5. pFR14 y pFR15 tienen su origen en el plásmido simbiótico de RS1051, y están altamente conservados en megaplásmidos de otras cepas de R. trifolii.

    6. Un mapa físico detallado de pFR14 y pFR15, y un mapa genético tentativo de los mismos, han sido construidos.

    7. Al menos algunas de las delecciones experimentales por el plásmido simbiótico de RS1051 tienen su origen en la región muy cercana a la de los genes nod, lo que, unido a la demostrada ausencia de todos los genes de la nodulación en todos los derivados que han sufrió delección, permite concluir la posibilidad de una secuencia de inserción nativa dirija el proceso de curación.