Role of the cytosolic malic enzyme and extracellular vesicles from Leishmania infantum in infection and immunity

• Autores: Franciso J. Loayza
• Directores de la Tesis: Pedro José Alcolea Alcolea (codir. tes.), Vicente Larraga Rodríguez de Vera (codir. tes.), José María Requena Rolanía (tut. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2025
• Idioma: inglés
• Número de páginas: 202
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Bautista Santa Cruz (presid.), Pedro Bonay Miarons (secret.), Inmaculada Moreno Iruela (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biociencias Moleculares por la Universidad Autónoma de Madrid
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La leishmaniasis es una enfermedad tropical desatendida transmitida por vectores y causada por parásitos intracelulares obligados del género Leishmania, cuyo ciclo biológico es digenético y en él se alternan los promastigotes en el vector flebotómino y el estadio amastigote dentro de las células fagocíticas del hospedador mamífero. La incidencia de esta enfermedad tropical desatendida es de casi un millón de personas. La leishmaniasis visceral (VL) es mortal en el 95% de los casos sin tratamiento. Leishmania infantum es el agente etiológico de la VL zoonótica, que es un problema de salud pública en el cual el perro es el principal reservorio. La quimioterapia actual está limitada por los efectos secundarios significativos y la aparición de resistencias a y no hay vacunas disponibles para uso humano. Para la leishmaniasis canina, Leish-Tec® está autorizada en Brasil, y Letifend® y Neoleish® en Europa. Ésta última es una vacuna de ADN que reduce la carga parasitaria en la médula ósea, donde el parásito se acantona. El objetivo principal de este estudio es dilucidar si la enzima málica citosólica (Li-cME) y las vesículas extracelulares (EVs) de L. infantum afectan la infectividad del parásito, y si la Li-cME y el contenido proteico de las EVs desempeñan un papel en la inmunidad del hospedador. La Li-cME se distribuye homogéneamente por todo el citoplasma y el flagelo en pequeñas acumulaciones en los promastigotes, y sus niveles permanecen invariables durante el crecimiento y la diferenciación de este estadio en cultivo, pero aumentan en los amastigotes derivados de células humanas U937 infectadas in vitro. Los transfectantes estables que sobre-expresan el gen Li-cME son más infectivos para esta línea celular y su actividad antioxidante aumenta. Curiosamente, la Li-cME produce NADPH y está presente en las EVs junto con factores de virulencia, proteínas inmunogénicas y el sistema de homeostasis redox, incluidas otras proteínas generadoras de NADPH. En el mismo modelo de infección in vitro, las EVs tienden a disminuir la infectividad, lo que probablemente se deba a la activación de los fagocitos antes de la entrada de los promastigotes. Las características mencionadas anteriormente de Li-cME y su baja similitud de secuencia con los ortólogos caninos y humanos motivaron un estudio de inmunogenicidad en ratones C57BL/6J como candidato a vacuna de ADN utilizando el vector plasmídico de expresión en mamíferos pPAL, que carece de genes de resistencia a antibióticos. El candidato pPAL-Li-cME desencadenó una respuesta Th1 específica y títulos elevados de anticuerpos IgG e IgM con una alta relación IgG2c/IgG1. Su combinación con pPAL-LACK (Neoleish®) también estimula una respuesta específica de células T citotóxicas CD4+ y CD8+ y activa sinérgicamente los esplenocitos productores de IFN-γ. Por lo tanto, el gen Li-cME se incluirá en una actualización de Neoleish® y potencialmente se aplicará a las leishmaniasis humanas.