Aislamiento y caracterización del secretoma del fluido folicular preovulatorio equino y su efecto en la producción in vitro de embriones equinos

• Autores: Marcos Luis Calero
• Directores de la Tesis: Beatriz Macías García (dir. tes.), Lauro González Fernández (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Extremadura ( España ) en 2026
• Idioma: español
• Número de páginas: 129
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Dehesa
• Resumen
  • español

    La producción in vitro de embriones equinos mediante inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) tiene un alto valor económico, pero su eficiencia es limitada. Esto se atribuye a que los medios de maduración in vitro (MIV) no reproducen fielmente el ambiente folicular preovulatorio, impidiendo que el ovocito adquiera su competencia de desarrollo completa. El secretoma del fluido folicular preovulatorio podría aportar moléculas bioactivas y vesículas extracelulares a los medios de MIV mejorando la calidad de los ovocitos.

    El secretoma se aisló y se observó una disminución de la concentración de metabolitos en comparación con el fluido folicular preovulatorio nativo y una composición importante en proteínas relacionadas con la respuesta inmune y el metabolismo de lipoproteínas y la presencia de VEs. Se recuperaron complejos cúmulo-ovocito (CCO) equinos in vivo y post-mortem y el secretoma se añadió a los medios de MIV a 0 μg/ml (CTR), 20 μg/ml (S20) y 40 μg/ml (S40). Se demostró que la suplementación con 40 μg/ml de secretoma mejoró la competencia meiótica y redujo la degeneración de los ovocitos obtenidos post-mortem, pero no en los in vivo. En estos ovocitos, la adición del secretoma incrementó la expresión de los genes TNF y TNFAIP6 en los CCOs. Además, el secretoma indujo el metabolismo de glucosa y otros metabolitos en los CCOs in vivo, afectando la expresión de LDHA. Sin embargo, la suplementación no tuvo un efecto significativo sobre las tasas de producción de blastocistos mediante ICSI ni sobre la expresión génica de calidad en los embriones resultantes.

  • English

    The in vitro production of equine embryos by intracytoplasmic sperm injection (ICSI) has substantial economic value, but its efficiency remains limited. This limitation is attributed to the inability of in vitro maturation (IVM) media to accurately replicate the preovulatory follicular environment, undermining the acquisition of full developmental competence by the oocyte. The secretome from preovulatory follicular fluid may provide bioactive molecules and extracellular vesicles to the IVM media, thereby improving oocyte quality.

    The secretome was isolated and a lower concentration of metabolites compared to the native preovulatory follicular fluid was observed. Besides, secretome was found to contain a significant abundance of proteins associated with immune responses and lipoprotein metabolism, as well as extracellular vesicles. Equine cumulus–oocyte complexes (COCs) were collected both in vivo and post-mortem, and the secretome was added to the IVM media at 0 μg/ml (CTR), 20 μg/ml (S20), and 40 μg/ml (S40). Supplementation with 40 μg/ml secretome enhanced meiotic competence and reduced degeneration in post-mortem–derived oocytes, although no such effect was observed in those obtained in vivo. Furthermore, the addition of secretome increased the expression of TNF and TNFAIP6 genes in COCs. It also stimulated glucose metabolism and other metabolic pathways in in vivo–derived COCs, affecting LDHA expression. However, supplementation did not significantly influence blastocyst production rates following ICSI, nor did it affect the expression of quality-related genes in the resulting embryos.