Aislamiento e identificación de un compuesto marcador para el control de calidad, seguridad y eficacia de Valeriana edulis ssp procera

• Autores: Alejandro Alfaro Romero
• Directores de la Tesis: Andrés Navarrete Castro (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Nacional Autónoma de México ( México ) en 2020
• Idioma: español
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: ru.dgb.unam.mx
• Resumen
  • español

    Valeriana edulis ssp procera es una planta ampliamente utilizada en la medicina herbolaria mexicana debido a sus efectos ansiolítico y sedante. Sin embargo, no existe un método para realizar el control de calidad de los productos elaborados con ella. Por este motivo el proyecto se enfocó en el estudio de la raíz y del extracto hidroalcohólico fabricado a partir de esta especie con la finalidad de establecer los parámetros de calidad de la droga para la elaboración de la monografía farmacopéica. El estudio comenzó con la identificación taxonómica y la determinación de los parámetros de calidad de la droga, se establecieron los perfiles cromatográficos por CCF, CLAR y GC, asimismo derivado de estos resultados se propuso como compuesto marcador a linarina por análisis de cromatografía de líquidos de alta resolución (CLAR). Se realizó la estandarización del extracto hidroalcohólico de Valeriana edulis ssp. procera mediante la determinación del contenido de linarina. El método analítico propuesto fue validado y cumplió con todos los parámetros de desempeño en el rango de concentraciones ensayadas. Por otra parte, se determinó la inocuidad preclínica para la raíz de esta planta con las pruebas de toxicidad aguda y subcrónica en ratones y ratas, de acuerdo con los procedimientos descritos por Lorke y la OECD. El estudio de la toxicidad permitió establecer que el extracto hidroalcohólico no es tóxico, reportando una dosis letal media mayor a 2000 mg/kg en ambos casos. Esto clasifica al extracto dentro de la categoría 5 del Sistema Mundialmente Armonizado indicando que no es riesgoso para la salud. La eficacia preclínica de la droga se evaluó mediante la aplicación de un perfil neurofarmacológico con pruebas exploratorias para determinar su efecto sobre el SNC, considerando pruebas de conducta, actividad motriz y de percepción sensorial. El extracto hidroalcohólico mostró potencial ansiolítico en la prueba del cilindro de exploración (DE50 = 83.4 mg/kg) y actividad antinociceptiva dosis no dependiente en el modelo de estiramiento abdominal. El extracto también mostró efecto sobre la coordinación motora y la miorrelajación a la dosis de 1000 mg/kg. El estudio químico del extracto hidroalcohólico preparado a partir de la raíz de V. edulis ssp. procera permitió el aislamiento y la caracterización de una mezcla de valepotriatos, linarina y valeiridósido A. Este último, un compuesto no reportado en la literatura. La evaluación de la mezcla de valepotriatos mostró una actividad antinociceptiva en la prueba de retiro de cola por inmersión en agua caliente y en agua fría (10 y 31 mg/kg); en la prueba de formalina, en la fase 1 (10 y 31 mg/kg) y en la fase 2 (10 mg/kg), así como en la prueba de Randall-Selitto (31 y 100 mg/kg). La actividad antiinflamatoria también se observó para estos compuestos en el modelo de inflamación inducida por carragenina (1 - 100 mg/kg). Se realizó la evaluación del valeiridósido A y la linarina por medio de un perfil neurofarmacológico, donde linarina sólo alteró la coordinación motora a la dosis de 10 mg/Kg. Por otra parte, para el valeiridósido A se observó un efecto ansiogénico en la prueba del cilindro de exploración a la dosis de 10 mg/kg; por lo que se decidió explorar el mecanismo de acción, el cual sugiere que el compuesto es un modulador de los receptores 5-HT1 el cual disminuye la liberación de GABA provocando un aumento en la ansiedad.

  • English

    Valeriana edulis ssp procera is a plant widely used in Mexican herbal medicine due to its anxiolytic and sedative effect. However, there is no method for quality control of the products made with it. For this reason, the project focused on the study of the root and the hydroalcoholic extract manufactured from this species to establish the quality parameters of the drug for the preparation of the pharmacopoeic monograph. The study began with the taxonomic identification and determination of the drug quality parameters, established chromatographic profiles by TLC, HPLC and GC, also of these results, linarine was proposed as a marker compound by high-performance liquid chromatography analysis (HPLC). The hydroalcoholic extract of Valeriana edulis ssp procera was standardized, through by determining the linarine content. The proposed analytical method was validated and met all the performance parameters in the range of concentrations tested. Preclinical safety was determined for V. edulis ssp. procera with the acute and subchronic toxicity tests in mice and rats, according to the procedures described by Lorke and the OECD. The toxicity study allowed establishing that the hydroalcoholic extract is not toxic, reporting a mean lethal dose (LD50) greater than 2000 mg / kg in both cases. This classifies the extract into category 5 of the Globally Harmonized System indicating that it is not risky for health. The preclinical efficacy of the drug was evaluated by applying a neuropharmacological profile with exploratory tests to determine its effect on the CNS, considering tests of behavior, motor activity, and sensory perception. The hydroalcoholic extract was shown to have an anxiolytic potential in the exploration cylinder test (ED50 = 83.4 mg / kg) and a dose-dependent antinociceptive activity in the abdominal stretch model. The extract also showed an effect on motor coordination and muscle relaxation at the dose of 1000 mg / kg. The chemical study of the hydroalcoholic extract prepared from the root of V. edulisssp. procera allowed the isolation and characterization of a mixture of valepotriates, linarine and valeiridoside A. The latter, a compound not reported in the literature. Evaluation of the valepotriate mixture showed antinociceptive activity in the tail flick test by immersion in hot and in cold water (10 and 31 mg / kg). Also, in the formalin test, both in phase 1 (10 and 31 mg / kg) and in phase 2 (10 mg / kg) and in the Randall-Selitto test (31 and 100 mg / kg) showed antinociceptive activity. Anti-inflammatory activity was also observed for these compounds in the model of carrageenan-induced inflammation (1-100 mg / kg). An evaluation of valeiridoside A and linarine was carried out by means of a neuropharmacological profile, where linarine only altered motor coordination at the dose of 10 mg / Kg. On the other hand, valeiridoside A induced an anxiety-causing effect was observed in the exploration cylinder test at the dose of 10 mg / kg; This is why it was decided to explore the mechanism of action, suggesting that this compound is a modulator of 5-HT1 receptors that decreases the release of GABA causing an increase in anxiety.