Expresión génica y proteica de la subfamilia TRPV (TRPV1, TRPV2, TRPV3, TRPV4, TRPV5 y TRPV6) en pacientes con colitis ulcerosa crónica idiopática

• Autores: Joel Toledo Mauriño
• Directores de la Tesis: Jesús K. Yamamoto Furusho (dir. tes.), Julio Granados Arriola (codir. tes.), Gabriela Fonseca Camarillo (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Nacional Autónoma de México ( México ) en 2021
• Idioma: español
• Número de páginas: 107
• Tribunal Calificador de la Tesis: Armando Tovar (presid.), Jesús K. Yamamoto Furusho (secret.), Alejandro Zentella Dehesa (voc.), Martha Robles Flores (voc.), Nahum Méndez Sánchez (voc.)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: ru.dgb.unam.mx
• Resumen
  • español

    Antecedentes La CUCI (Colitis Ulcerosa Cronica Idiopatica) y la enfermedad de Crohn (EC) representan los dos principales tipos de enfermedad inflamatoria intestinal. Los miembros de la subfamilia de receptores de potencial transitorio activados por vaniloides (TRPV) está conformada por 6 miembros (TRPV1-6) con grados variantes de homologia en la secuencia de aminoácidos. Sin importar estas similitudes, los TRPV son altamente inusuales entre las familias conocidas de canales de iones en el hecho de que muestran una gran diversidad de selectividad a cationes y mecanismos de activacion especificos los cuales se han visto relacionados con el desarrollo de procesos inflamatorios a nivel intestinal.

    Objetivo: Caracterizar la expresión génica de la subfamilia de canales receptores de potencial transitorio activados por vaniloides (TRPV), en los pacientes con Colitis Ulcerosa Crónica Idiopática.

    Materiales y Métodos: Estudio transversal y comparativo que incluirá un total de 45 pacientes con CUCI (29 activos y 16 en remisión) y 26 controles. Se obtuvo biopsia de recto durante estudio endoscópico de seguimiento de los pacientes incluidos en el estudio, conservación en RNAlater. Se obtuvieron cortes de piezas quirúrgicas de 5 pacientes colectomizados por CUCI con actividad grave y 5 controles que consistiran en pacientes colectomizados por cancer de colon (zona normal). Se llevo a cabo Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real de TRPV 1-6 utilizando como genes constitutivos GAPDH y b-actina. Se llevó a cabo Inmunohistoquimica Indirecta. Realizacion de Analisis Estadistico empleando SPSS v.22 e Image Pro Plus v.11.0.

    Resultados Los niveles de expresion génica de TRPV1 en el caso del grupo con CUCI en remisión fueron significativamente más altos que en el grupo de pacientes con CUCI activo y controles sanos.

    El grupo de pacientes con CUCI activo mostró un nivel de expresión génica de TRPV2 más alto que el grupo de controles sanos y CUCI remisión. El grupo control sano mostró un nivel de expresión génica de TRPV3 significativamente mayor que tanto el grupo de CUCI activo como el remisión. El grupo de pacientes con CUCI en remisión mostro un nivel de expresión génica de TRPV4 significativamente mayor que los pacientes con CUCI activo y los controles sanos. El nivel de expresión génica de TRPV5 de los pacientes control fue mayor que tanto los pacientes con CUCI activo como remisión. El grupo de pacientes con CUCI en remisión mostro un nivel de expresión de TRPV6 mayor que los grupos de CUCI activo y el grupo control no inflamatorio. El grupo de pacientes con CUCI activo mostró un nivel de expresion proteica significativamente mayor de TRPV1 a lo largo de todas las capas intestinales teniendo como probables estirpes celulares células de origen linfoide y células endoteliales. El nivel de expresión proteica de TRPV2 fue significativamente más alto en el caso de los pacientes control en comparacion con los pacientes con CUCI grave en submucosa y mucosa, aunque en muscular y serosa fue mayor que en el caso de los pacientes con CUCI activo en comparación con los pacientes control. El nivel de expresión proteica de TRPV3 fue significativa en el caso de pacientes control en comparación con los pacientes con CUCI activo a lo largo de todas las capas del intestino con detección tanto en células del epitelio intestinal, células de origen linfoide, células musculares y células del endotelio. El nivel de expresion proteica de TRPV4 fue significativamente mayor en el caso de los pacientes Control en comparación con los pacientes con CUCI grave a lo largo de todas las capas a expensas de celulas origen linfoide y celulas endoteliales. El nivel de expresión de TRPV5 fue significativamente mayor que los pacientes control solo en caso de la submucosa y la serosa en comparación con los cortes de los pacientes con CUCI activo a expensas de células del epitelio intestinal, células de origen linfoide y células endoteliales. Los pacientes con CUCI activo mostraron un nivel de expresión proteica de TRPV6 significativamente mayor en comparacion con el de las laminillas control a lo largo de todas las capas intestinales a expensas de células de origen linfoide y del epitelio intestinal.

    Conclusiones: La subfamilia TRPV claramente esta involucrada en el desarrollo del proceso inflamatorio en pacientes con Colitis Ulcerosa Crónica Idiopática.

  • English

    Antecedents The members of the subfamily of transitory receptor potential channels activated by vanilloids (TRPV) is conformed by 6 members (TRPV1-6) with varying degrees of secuence homology and cation permeability. Without taking into account such simmilitudes, TRP are highly unusual between the known families of ion channels in the fact that they show a great diversity of selectity to cations and activation mechanisms that have been related to the development of bowel inflammation.

    Objective: To characterize the genic expression of the subfamily of transient receptor potential channels activated by vanilloids (TRPV) in patients with Ulcerative Colitis.

    Materials and Methods Transversal and comparative type study that included a total of 45 UC patients (29 active UC and 16 remission UC) and 26 controls. Biopsy was obtained from rectum during the endoscopic study of follow-up in the patients included in the study, conservation in RNAlater. Surgical specimens were obtained from 5 patients colectomized due to severe disease and 5 controls that consisted of patients colectomized due to colon cancer (normal zone). Real Time Polymerase Chain Reaction was done for TRPV1-6 using GAPDH and b- actin as constitutive genes. Indirect inmunohistochemistry was done for the same TRPV1-6 genes using the obtained surgical specimens. Statistical analysis was done employing SPSS v.22.0 and Image Pro Plus v.11.0.

    Results Levels of gene expression of TRPV1 in the case of the group with remission UC were significantly higher than the group of patients with active UC and healthy controls. The group of patients with active UC showed a higher level of gene expression than the group of healthy controls and remission UC. The group of healthy controls showed a level of gene expression of TRPV3 significantly higher than the one of the active UC group as the one of remission UC. The group of patients with remission UC showed an expression level of TRPV4 significantly higher than the one of the patients with active UC and healthy controls. The level of gene expression of TRPV5 of the control patients was higher than the one of the patients with active UC and remission UC. The group of remission UC patients showed an expression level of TRPV6 higher than the one of the groups with active UC and the non- inflammatory control group. The group of patients with active UC showed a protein expression level significantly higher of TRPV1 through all the intestinal layers taking as probable cell types cells from lymphoid origin and endothelial cells. The level of protein expression of TRPV2 was significantly higher in the case of the control patients in comparison with the patients with severe UC in submucosa and mucosa though in muscular and serosa it was higher than in the case of patients with active UC in comparison with the control patients. The level of protein expression of TRPV3 was significantly higher in the case of control patients in comparison with the patients with active UC through all the intestinal layers with detection in cells of intestinal epithelium, cells from lymphoid origin, muscular cells and endothelial cells. The level of protein expression of TRPV4 was significantly higher in the case of the control patients in comparison with the patients with severe UC through all layers having as source cells from lymphoid origin and endothelial cells. The level of expression of TRPV5 was significantly higher in control patients only in the case of submucosa and serosa in comparison with the slides of active UC patients having as cellular sources cells from intestinal epithelium, lymphoid origin cells and endothelial cells. Patients with active UC showed a level of protein expression of TRPV6 significantly higher in comparison with the control slides through all intestinal layers having as cell sources cells from lymphoid origin and from the intestinal epithelium.

    Conclusions The TRPV subfamily was involved in the development of the development of the inflammatory process in patients with Ulcerative Colitis.