Polimorfismo extrapituitario -1149 de PRL en pacientes con artritis reumatoide del sur de México: asociación con la expresión de su mRNA y variables clínicas

• Autores: José Eduardo Navarro Zarza
• Directores de la Tesis: José Francisco Muñoz Valle (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Nacional Autónoma de México ( México ) en 2021
• Idioma: español
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: ru.dgb.unam.mx
• Resumen
  • español

    Antecedentes: La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune sistémica que se caracteriza por la inflamación crónica y destrucción progresiva de las articulaciones.

    Su etiología es compleja e involucra interacciones entre factores genéticos, ambientales y hormonales que promueven la perdida de la tolerancia hacia antígenos propios favoreciendo la produccion de autoanticuerpos incluso en etapas subclínicas de la enfermedad.

    La prolactina (PRL) es considerada una hormona con propiedades inmunomoduladoras, ya que tiene la capacidad de activar a linfocitos T y B, los cuales son células clave en la fisiopatología de la AR. En el promotor extrapituitario del gen que codifica para la prolactina (PRL) se ubica el polimorfismo -1149 G>T, el cual se ha asociado con enfermedades autoinmunes, con lupus eritematoso generalizado (LEG) y AR.

    El objetivo principal de esta tesis de doctorado fue analizar la asociación del polimorfismo PRL -1149G> T con la susceptibilidad a la enfermedad, la expresión del mRNA y la proteína PRL en pacientes con AR del sur de México.

    Metodología: En el estudio se incluyeron 300 pacientes con AR y 300 sujetos control (CS). A los pacientes con AR se les determinaron los indices de actividad clínica (DAS- 28) y de discapacidad funcional (HAQ-DI). A ambos grupos se les determinaron parametros de laboratorio como: pCr y FR, por nefelometria; VSG, por el método Wintrobe, y se midieron los niveles sericos de los anticuerpos anti-CCP y de PRL mediante la técnica de ELISA. Los genotipos se identificaron mediante el método de PCR- RFLP, y la expresion de mRNA de PRL se determino mediante PCR en tiempo real.

    Resultados: La población del Sur de México se encontró en desequilibrio génico para el polimorfismo -1149 G>T del gen PRL, según el modelo de Hardy-Weinberg (p≤0.05). No obstante, se observaron diferencias estadísticamente significativas en la distribución de las frecuencias genotípicas (p=0.01) y alélicas (p=0.004) del polimorfismo entre pacientes con AR y sujetos control (SC). Así mismo, se aplicaron modelos genéticos de herencia (dominante, recesivo y aditivo), donde se observó una asociación significativa entre el alelo T y la disminución de la suceptibilidad para la AR (OR=0.55, IC 95% 0.35-0.87, p=0.009; OR=0.09, IC 95% 0.012-0.76, p=0.011; OR=0.49, IC 95% 0.32-0.76, p=0.001, respectivamente). Por otro lado, se encontró que los pacientes con AR tenían mayor expresión de mRNA y niveles solubles de PRL que los SC (p<0.05). Cuando se compararon los niveles solubles de PRL por el tiempo de la evolución de la enfermedad, se observó que los pacientes con <2 años de evolución tenían niveles séricos mas elevados que los pacientes con ≤2 años de evolución (p=0.013). Sin embargo, no hubo diferencias en los niveles sericos de PRL cuando se hizo la comparación por los diferentes genotipos del polimorfismo -1149 G>T del gen de PRL. Finalmente, los SC portadores de genotipos GT y TT mostraron una menor expresión de mRNA de PRL que los portadores de genotipo GG (7.1 veces y 20 veces respectivamente, p=0.006).

    Conclusiones: El desequilibrio genico para el polimorfismo -1149 G>T de PRL en la poblacion del Sur de Mexico puede deberse a procesos de endogamia en la población.

    No obstante, se demostró que el alelo -1149T de PRL es un marcador genético de disminucion del riesgo para desarrollar AR en la poblacion del sur de México, y está asociado con la baja expresion de mRNA de PRL en sujetos sanos. Los niveles sericos de PRL disminuyen conforme al tiempo de evolucion de la AR en los pacientes de la población del Sur de México.

  • English

    Background: Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic autoimmune disease characterized by chronic inflammation and the progressive destruction of the joints. The etiology of RA is complex, it involves interactions between genetic, enviromental and hormonal factors that promote the loss of tolerance to own antigens and initiate the production of autoantibodies even in subclinical stages of the disease.

    Prolactin (PRL) is considered a hormone with immunomodulatory properties, as it has the ability to activate T and B lymphocytes, which are key cells in the pathophysiology of RA.

    The polymorphism -1149 G> T is located in the extrapituitary promoter of the gene coding for prolactin (PRL), which has been associated with autoimmune diseases, with generalized lupus erythematosus (LEG) and AR.

    The principal objective of this project was to analyze the association of PRL -1149G> T polymorphism with disease susceptibility, mRNA expression and PRL protein in patients with RA in southern Mexico.

    Methodology: The study included 300 RA patients and 300 control subjects (CS).

    Patients with RA have determined the rates of clinical activity (DAS-28) and functional disability (HAQ-DI). Both groups were determined laboratory parameters such as CRP and FR, by nephelometry; VSG, by the Wintrobe method, and serum levels of anti-CCP and PRL antibodies were measured by the ELISA technique. Genotypes were identified by the PCR-RFLP method, and PRL mRNA expression was determined by real-time PCR.

    Results: The population of Southern Mexico was in a genetic imbalance for the polymorphism -1149 G> T of the PRL gene, according to the Hardy-Weinberg model (p≤0.05). However, statistically significant differences were observed in the distribution of genotypic (p = 0.01) and allelic (p = 0.004) frequencies of polymorphism between patients with RA and control subjects (CS). Likewise, genetic inheritance models (dominant, recessive and additive) were applied, where a significant association was observed between the T allele and the decrease in susceptibility for RA (OR = 0.55, 95% CI 0.35- 0.87, p = 0.009; OR = 0.09, 95% CI 0.012-0.76, p = 0.011; OR = 0.49, 95% CI 0.32-0.76, p = 0.001, respectively). On the other hand, it was found that patients with RA had higher mRNA expression and soluble levels of PRL than SC (p <0.05). When soluble levels of PRL were compared by the time of disease evolution, it was observed that patients with <2 years of evolution had higher serum levels than patients with ≤2 years of evolution (p = 0.013). However, there were no differences in serum PRL levels when the comparison was made by the different genotypes of the -1149 G> T polymorphism of the PRL gene.

    Finally, the SC carriers of GT and TT genotypes showed a lower expression of PRL mRNA than the GG genotype carriers (7.1 times and 20 times respectively, p = 0.006).

    Conclusions: The gene imbalance for the polymorphism -1149 G> T of PRL in the population of Southern Mexico may be due to inbreeding processes in the population.

    However, it was shown that the -1149T PRL allele is a genetic marker of decreased risk for developing RA in the population of southern Mexico, and is associated with the low expression of PRL mRNA in healthy subjects. Serum levels of PRL decrease according to the time of evolution of RA in patients in the population of Southern Mexico.