Detección y caracterización molecular de protistas entéricos en primates no humanos en cautividad y salvajes.: Transmisión zoonósica e implicaciones en Salud Pública Veterinaria.

• Autores: Pamela Carolina Köster
• Directores de la Tesis: David Carmena Jimenez (dir. tes.), Rafael Calero Bernal (dir. tes.), Francisco Ponce-Gordo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2023
• Idioma: español
• Número de páginas: 600
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Antonio Escario Garcia Trevijano (presid.), Juan José García Rodríguez (secret.), Miguel de Górgolas Hernández-Mora (voc.), Israel Cruz Mata (voc.), Luis Miguel González Martínez (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Microbiología y Parasitología por la Universidad Complutense de Madrid
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología animal (zoología)
      • Parasitología animal
      • Primates
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen
  • español

    The alarming conservation status of most species of non-human primates (NHP) has triggered an increasing interest for the infectious diseases that affect their health and welfare and, at the same time, jeopardize their survival. In this context, available data on the epidemiology of the parasitic protist species that cause diarrhoeal disease in NHP are scarce.This PhD work has determined the frequency and genetic diversity of the main pathogenic and non-pathogenic protist species found in faecal samples of captive (zoological gardens), semi-wild (sanctuaries) and wild (natural protected areas) NHP populations by using molecular (PCR and Sanger sequencing) methods. Participating institutions came from Africa (n = 4), the Americas (n = 1), and Europe (n = 7), and included nine zoological gardens from five countries (France, Germany, Ivory Coast, Peru, and Spain), a chimpanzee sanctuary (Sierra Leone), and two natural protected areas (Ivory Coast and Senegal)...

  • español

    El preocupante estado de conservación en el que se encuentran la mayoría de las especies de primates no humanos (PNH) ha despertado el interés por investigar las enfermedades infecciosas que pueden afectar a su salud y bienestar y amenazar su supervivencia. En este trabajo de tesis doctoral se determinó la frecuencia y variabilidad genética de las principales especies de protistas entéricos patógenos y no patógenos en muestras fecales de poblaciones de PNH en cautividad (zoológicos), semilibertad (santuarios) y salvajes (áreas protegidas).

    Las instituciones participantes estaban ubicadas en África (n = 4), América (n = 1) y Europa (n = 7), y entre ellas se encontraban 9 zoológicos de 5 países diferentes (Alemania, Costa de Marfil, España, Francia y Perú), un santuario de chimpancés (Sierra Leona) y dos espacios protegidos (Costa de Marfil y Senegal). Se obtuvieron 979 muestras fecales de 35 géneros y 75 especies diferentes de PNH, así como de 110 trabajadores de esas instituciones (personal veterinario, investigadores, guardas forestales y asistentes de campo), en contacto directo o indirecto con PNH, que voluntariamente decidieron participar en el estudio con el fin de determinar la frecuencia y direccionalidad de eventos de transmisión zoonósica. Todas las muestras fecales fueron recogidas entre octubre de 2018 y agosto de 2021 y procedían de individuos asintomáticos.

    Mediante el uso de técnicas moleculares basadas en PCR y secuenciación Sanger se determinó que el 38,5% y el 25,5% de las muestras fecales investigadas de PNH y humanos, respectivamente, eran portadoras de al menos una especie de protista entérico. En función del estatus (cautividad, semilibertad, salvaje) de las poblaciones de PNH investigadas, se identificó la presencia de los protistas Giardia duodenalis (18%, 33%, 3%), Cryptosporidium spp. (0,7%, 0,0%, 0,8%), Entamoeba dispar (13%, 2%, 17%), Balantioides coli (2%, 0,0%, 0,0%), Troglodytella abrassarti (2%, 0,0%, 5%), Blastocystis sp. (23%, 22%, 7%) y Enterocytozoon bieneusi (1%, 0,0%, 0,0%). Todas las muestras fecales de PNH analizadas fueron negativas a Entamoeba histolytica. En humanos, los protistas entéricos hallados fueron G. duodenalis (5%), Cryptosporidium spp. (2%), E. dispar (1%) y Blastocystis sp. (20%). Ninguna de las muestras de origen humano analizadas fue positiva a E. histolytica, B. coli o E. bieneusi.

    Respecto a la información molecular obtenida en PNH, dentro de G. duodenalis se hallaron los sub-assemblages AI (5%), AII (14%), BIII (5%) y BIV (62%). Los aislados restantes (14%) pertenecían al assemblage B (sub-assemblage desconocido). Todos los aislados de Cryptosporidium spp. fueron identificados como Cryptosporidium hominis (71%) o Cryptosporidium parvum (29%). Se observó una gran variabilidad dentro de Blastocystis sp., incluyendo los subtipos ST1 (48%), ST2 (10%), ST3 (21%), ST4 (3%), ST5 (12%), ST8 (5%) y ST13 (1%). Finalmente, los genotipos CAF4 (17%), CM18 (50%), Type IV (17%) y D (17%) fueron identificados en E. bieneusi. En humanos, ninguno de los aislados identificados como G. duodenalis pudo ser genotipado. Todas los aislados positivos a Cryptosporidium spp. pertenecían a C. hominis (50%) o C. hominis/C. parvum (50%), mientras que las variantes genéticas de Blastocystis sp. halladas fueron ST1 (45%), ST2 (9%), ST3 (23%) y ST4 (23%).

    Se demostró la existencia de eventos de transmisión zoonósica bidireccional involucrando a Blastocystis sp. (ST1 alelo 4, ST1 alelos 1 y 2, ST3 alelo 34 y ST4 alelo 42) entre PNH en cautividad y sus cuidadores en varios zoológicos españoles.

    Este trabajo también evaluó y confirmó la utilidad práctica de tarjetas Whatman® para la conservación y mantenimiento de muestras fecales por periodos prolongados de tiempo (hasta 6 meses) a temperatura ambiente y su posterior uso en técnicas moleculares, incluyendo las de detección y genotipado, posibilitando su uso en estudios de campo donde no se pueda garantizar la cadena de frío.