Detección y análisis del ADN extracelular en plasma de pacientes de cáncer colorrectal evaluación de la capacidad del plasma de transfectar y transformar células en cultivo

• Autores: Carolina Domínguez Berzosa
• Directores de la Tesis: Damián García Olmo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2010
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Alberto Muñoz Terol (presid.), Cristóbal Belda Iniesta (secret.), Ricardo Sánchez Prieto (voc.), Antonio Bernad Miana (voc.), Manuel Serrano Marugán (voc.)
• Materias:
  • Ciencias médicas
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • En determinados tipos de cáncer, como el colorrectal (CCR), la mortalidad es debida al desarrollo de metástasis, y no al tumor primario. Sin embargo, el proceso de progresión y diseminación tumoral es aún una cuestión sin esclarecer, habiéndose postulado muy diversas teorías que tratan de explicarlo.

    La detección de ADN circulante en el plasma de los pacientes de cáncer, ha suscitado un gran interés en la comunidad científica, ya que abre nuevas posibilidades para facilitar el diagnóstico y el pronóstico de la enfermedad. Es un hecho demostrado que ácidos nucleicos extracelulares circulan en sangre, aunque aún no se ha podido establecer con precisión cuál es su origen, el mecanismo de liberación, y su implicación en la fisiopatología de esta enfermedad.

    En el presente estudio hemos puesto a punto una técnica de PCR en tiempo real que permite la detección de mutaciones puntuales en el codón 12 del exón 1 del oncogén K-ras humano. Por otro lado, hemos querido evaluar la capacidad transfectante del plasma humano sobre células en cultivo, y determinar si el plasma de pacientes de CCR tiene actividad biológica capaz de provocar una transformación oncogénica de las células.

    Para ello, realizamos cultivos de células NIH-3T3 (fibroblastos de ratón inmortalizados) y hASCs (del ingles, human Adipose Stem Cells) con el plasma de pacientes y de voluntarios sanos. Aplicamos dos protocolos: contacto directo entre plasma y células, y contacto a través de membranas con poro de 0,4 micras. Posteriormente, estas células fueron inoculadas en ratones inmunodeficientes NOD-SCID.

    Las células NIH-3T3 cultivadas con los plasmas de pacientes incorporaron secuencias mutadas y no mutadas del oncogén K-ras humano, así como otras secuencias humanas no relacionadas directamente con el proceso canceroso (p53 y ß-globina). Al inocularlas en los ratones NOD-SCID dieron lugar a tumores, que tras un estudio histopatológico se identificaron como carcinomas indiferenciados. Por el contrario, en las células hASCs la detección de ADN tumoral fue negativa, y cuando se inyectaron en animales inmunodeficientes no dieron lugar a tumores.

    El presente trabajo demuestra, por primera vez, que el plasma de pacientes de CCR tiene capacidad de transfectar y transformar oncogénicamente células NIH-3T3 en cultivo, y que tal efecto no sucede en células madre adultas humanas.

    Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la Hipótesis de las Genometástasis, formulada hace una década, según la cual, las metástasis ocurrirían a través la transfección de células susceptibles localizadas en órganos diana a distancia mediante oncogenes dominantes que derivarían del tumor primario, y que circulan en el plasma de los pacientes con cáncer.