Expresión y selección funcional de proteínas de bacterias mesófilas en thermus thermophilus

• Autores: Eddy Caro Azoy
• Directores de la Tesis: José Berenguer Carlos (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ricardo Amils Pibernat (presid.), Irma Marín Palma (secret.), María José Bonete Pérez (voc.), Ana Arraztio García (voc.), I. Santamaria Ramm (voc.)
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• Resumen

  • Este trabajo aborda el desarrollo de nuevas metodologías para la expresión estable de genes mesófilos en Thermus thermophilus. Se realizó la selección funcional de dos proteínas, una glucosamina-6-P-sintasa híbrida, obtenida por fusión del cominio amino terminal (Nt) de Thermus thermophilus y el dominio carboxilo (Ce) de E.coli, obteniendo un gen quimérico que se inserto mediante recombinación en el cromosoma de la bacteria termófila y se procedió posteriormente a su selección en el cromosoma de la bacteria termófilia y se procedió posteriormente a su selección funcional a temperaturas crecientes bajo condiciones nutricionales restrictivas. Al tratarse de un gen vital, relacionado con la síntesis del peptidoglicano de la pared celular, su expresión y posterior selección en "batch", condujo a la sobreexpresión de la proteína como respuesta termoadaptativa, probablemente por alteración de un gen regulador no identificado. El otro gen clonado, Xhis1, procedente de Strptomyces halstedii JM8, codifica una beta-1,4-endoxilanasa que es secretada el medio de cultivoL la expresión y posterior selección del enzima en presencia de xilano como fuente de carbono a temperaturas crecientes hasta 70ºC, provocó la selección de mutaciones en la región -10 del promotor de slpA (gen que codifica la proteína principal de la capa S de Thermus), que conllevaron a una sobreexpresión de la misma, lo que permitió el crecimiento de Thermus thermophilus a expensas de un sustrato macromolecular. Este trabajo ofrece nuevas alternativas a la posibilidad de seleccionar enzimas termoestables mediante metodologías de evolución dirigida.