Análisis fenotípico linfocitario y del ciclo celular en biopsias ganglionares mediante citometría de flujo
- Autores: Rosa María Muñoz Benito
- Directores de la Tesis: Alberto Durántez Martínez (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2002
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Melchor Álvarez de Mon Soto (presid.), José Rafael Cabrera Marín (secret.), Julia Jordá Tormo (voc.), R. Laguna Martínez (voc.), Pilar España Saz (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La Citometría de Flujo es una técnica dinámica que permite realizar un análisis multiparamétrico de células en suspensión.
OBJETIVOS Realizar un análisis inmunofernotípico por C.F., de las subpoblaciones linfocitarias en biopsias ganglionares. Estudiar la ploidía y el ciclo celular. Analizar la Apoptosis y la expresión de bc-2, p53 y FAS. Estudio de la expresión del fenotipo MDR. Se han analizado 185 muestras (62 procesos benignos, 73 Linfomas No-Hodgkin (LNH), 28 Enfermedad de Hodgkin (EH) y 21 metástasis ganglionares.
METODOLOGÍA Tras obtener la suspensión celular se incubaron las células con combinaciones de Anticuerpos monoclonales (Ac) marcados con fluorocromos ó con loduro de Propidio (IP). Panel con las combinaciones de Ac:
CD45-CD14-HLADR; CD3-CD56/CD4-CD8; CD20-k-*; CD19-k-*; CD19-CD20-CD5; CD19-CD20-CD-10; CD5-CD23-CD10; CD3-CD-25-HLADR; CD3-alfa,beta-gamma*; CD3-CD4-CD8; CD45RA-CD45RO-CD4; CD45RA-CD45RO-CD8; CD15-CD30-CD45; CD16-CD56-CD3; CD3-CD95; CD19-CD95-CD5; MDR; bcL-2; p53; IP; Anexina.
La adquisión se hizo en un citómero FACSort con los programas Lysis-II y Cell-Fit y el análisis con Paint-a-gate.
RESULTADOS En muestras benignas la población mayoritaria está constituída por célula T no activada, predominando los linfocitos colaboradores vírgenes (CD4CD45RO).
La mayoría de las células se hallan en fase G0-G1 del ciclo.
Las Metástasis ganglionares se reconocen por la presencia de una población que no expresa CD45. Se halla aumentada la población de célula T activada CD3HLA-DR y las subpoblaciones Cd8 y CD3CD56. Se eleva el porcentaje de células en fase de Síntesis. En EH: Se observa un aumento de CD3CD25 y de la subpoblación de linfocitos colaboradores de memoria CD4D45RO, elevandose el porcentaje de CD3-TcRgamma*.
Los LNH-B fueron identificados por restricción de cadenas ligeras de superficie con una sensibilidad del 87% y por un predominio de la población CD19. L
