Resumen de La subunidad PB2 de la polimerasa del virus de la gripe es esencial para la replicación viral
Pablo Gastaminza Landart
El virus de la gripe posee un genoma de RNA segmentado de cadena sencilla y polaridad negativa que es replicado y transcrito en el núcleo de la células infectada. Dicho genoma se encuentra organizado en forma deribonucleoproteínas (RNPs), encapsidado por la nucleoproteína NP y asociado por sus extremos a la RNA polimerasa viral. La RNP viral es la unidad funcional mínima requerida para los procesos de replicación y transcripción, procesos que son llevados a cabo por un único complejo de RNA polimerasa formado por tres subunidades PB1, PB2 y PA. El proceso de iniciación de la transcripción tiene lugar por un mecanismos de robo de cap o cap snatching por el que la polimerasa reconoce, a través de PB2 el extremo 5' cap de mRNAs celulares, provocando un corte endunucleolítico a una distancia variable de entre 9-15nt del extremo 5' para dar lugar a un oligonucleótido con cap que es empleado como iniciador de la transcripción.
Con el ánimo de identificar posiciones implicadas en el reconocimiento de la estructura cap en PB2, se generó una alineamiento de secuencias representativas de PB2 de distintos Orthomixovirus con otras proteínas capaces de reconocer dicha estructura. Se han generado mutaciones puntuales en el extremo N-terminal de PB2 en posiciones alineadas con residuos conservados de eIF4E, factor celular de unión a cap, implicados en el reconocimiento de dicha estructura.
Dichos mutantes han sido analizados en un sistema de reconstitución in vivo de RNPs recombinantes que ha revelado que las mutaciones afectan selectivamente la actividad replicativa de las RNPs mutantes, como sugieren los análisis de RNA llevados a cabo mediante ensayos de protección de Rnasa de sondas específicas para detectar el intermediario de replicación de polaridad positiva (cRNA) y el RNA genómico (vRNA). Estas mutaciones no afectan, sin embargo la capacidad transcripcional de dichos mutantes, tal y como se determinó mediante análisi
