Relevancia de la fusión celular y de los hepatocitos de novo como fuentes de hepatocitos en la homeostasis, daño, envejecimiento y regeneración hepáticas en ratones reporteros de linaje celular

• Autores: Elena Vázquez Ogando
• Directores de la Tesis: Francisco Javier Vaquero Martin (dir. tes.), Rafael Bañares Cañizares (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2023
• Idioma: español
• Número de páginas: 181
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Pérez Vizcaíno (presid.), Yulia Nevzorova Chujina (secret.), Jorge Gracia Sancho (voc.), María Victoria Gómez Gaviro (voc.), Raquel Herrero Hernández (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Investigación Biomédica por la Universidad Complutense de Madrid
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen
  • español

    El presente trabajo se centró en dos fuentes alternativas de hepatocitos: las células progenitorasintrahepáticas,que al proliferar y diferenciarse dan lugar a hepatocitos de nuevo linaje o hepatocitos de novo,y el fenómeno de fusión celular entre hepatocitos y células de estirpe mieloide.El OBJETIVO global fue generar conocimiento sobre los dos fenómenos y evaluar la influencia de la edad, empleando modelos de daño hepático,inflamación,yregeneración hepática en camadas de ratones fruto del cruce de ratones mT/mG reporteros de doble fluorescencia y ratones con el gen de la enzima Cre recombinasa bajo el promotor de la lisozima (LysMCre) o de la albúmina (AlbCre).Los objetivos específicos fueron:1) Desarrollar una metodología para cuantificar los fenómenos de fusión celular y los hepatocitos de novo en ratones transgénicos mT/mG.2) Respecto al fenómeno de fusión celular,determinar su frecuencia en el hígado de ratones fisiológicamente normales,los efectos de la edad y de diversos insultos hepáticos, y si poseen una ventaja proliferativa.3)Respecto a los hepatocitos de novo: determinar su proporción en el hígado de ratones sanos,el efecto de la edad,su capacidad proliferativa y la posible relación de esta con el grado de proliferación celular global del hígado.RESULTADOS: El FACS de células primarias aisladas de hígados de ratones no fue sensible y específico para cuantificar los eventos de fusión.Por el contrario,la presencia de fusiones y de hepatocitos de novo se detectaron adecuadamente mediante microscopía confocal.Estudio de fusión celular: Mediante microscopia confocal, detectamos hepatocitos mG+ en ratones LysMCre x mT/mG fisiológicamente normales.La frecuencia de hepatocitos mG+ varió en ratones de 3 a 22 meses de edad entre menos de 1 de cada 900.000 hepatocitos hasta 1 de 66.575 hepatocitos.Sólo los ratones de edad muy avanzada presentaron una elevación significativa de la proporción de hepatocitos mG+ respecto al total de hepatocitos evaluados.La inducción de inflamación sistémica,de daño hepático agudo,y de daño hepático crónico y fibrosis en ratones LysMCre x mT/mG no influyó en la presencia de hepatocitos mG+, y tampoco la realización de una hepatectomía parcial en ratones sin y con antecedentes de daño hepático agudo. Estudio de hepatocitos de novo:Mediante microscopia confocal, observamos una marcada disminución de la proporción de hepatocitos mT+ en los ratones AlbCre x mT/mG de edad más avanzada (16-18 meses)respecto a grupos de ratones de entre 2 y 14 meses de edad.CONCLUSIONES:1)La evaluación por microscopia confocal de tejido hepático procedentes de ratones mT/mG reporteros de linaje celular permite la detección precisa de fenómenos de frecuencia extremadamente baja.2)La frecuencia del fenómeno de fusión celular es extremadamente baja, pero puede ocurrir en contextos fisiológicamente normales en ratones.3)La frecuencia de la fusión celular en ratones aumenta en edades avanzadas.4) La inflamación sistémica,el daño hepático agudo,la fibrosis y el daño hepático crónico,y los estímulos proliferativos no provocan cambios evidentes en la frecuencia del fenómeno de fusión celular en el modelo experimental utilizado.Los hallazgos no apoyan una ventaja proliferativa de los hepatocitos fusionados.5)El compartimento de hepatocitos de novo representa el 0.17 % de todos los hepatocitos del hígado en ratones adultos fisiológicamente normales.6)Los hepatocitos de novo disminuyen marcadamente en edades avanzadas del ratón. CONCLUSIONES:1)La evaluación por microscopia confocal de tejido hepático procedentes de ratones mT/mG reporteros de linaje celular permite la detección precisa de fenómenos de frecuencia extremadamente baja.2)La frecuencia del fenómeno de fusión celular es extremadamente baja,pero puede ocurrir en contextos fisiológicamente normales en ratones.3)La frecuencia de la fusión celular en ratones aumenta en edades avanzadas.4)la inflamación sistémica,el daño hepático agudo,la fibrosis y el daño hepático crónico

  • English

    The main mechanism responsible for hepatocyte renewal is the proliferation of mature hepatocytes. The present work focused on two quantitatively minor and less characterized alternative sources of hepatocytes: a) intrahepatic progenitor cells, which, give rise to hepatocytes of a new lineage, or de novo hepatocytes, when they proliferate and differentiate, and b) the phenomenon of cell fusion between hepatocytes and myeloid-derived cells.The hypotheses of the work were:● The cell fusion phenomenon occurs under normal physiological conditions (outside of the context of organ transplantation or immunosuppression), and is induced byaging and various liver insults.● Aging induces a reduction in the de novo hepatocyte compartment and a decrease in their intrinsic proliferative capacity...